家蚕初期,蚕蛹蛋白与蚕蛹肤含有以上的人体必须氨基酸,还富含多种营养素,具有补充机体营养、促进生长发育、抗疲劳、抗衰老、提高人体免疫力等多种功能。近年来,蚕蛹蛋白在免疫、抗肿瘤等方面具有广泛的生理活性。其中在赵峰等家蚕相关蛋白质研究进展研究表明,蚕蛹含有丰富的蛋白质,其中经测定后含有18种人体所需的氨基酸,其中必需氨基酸占总体的40％,是一种理想蛋白质模式。所以研究蚕蛹体内蛋白具有重要意义。目前蛋白质组学中的蛋白质分离技术主要是双向电泳(2D-PAGE,Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis)。每个蛋白质都带有不同的等电点,所以依照这种特性进行等电聚焦(IEF Isoelectric focusiong)分离混合蛋白；接着根据不同大小的蛋白分子量进行SDS-PAGE凝胶电泳从而进一步分离混合蛋白,即依据蛋白分子量的不同对蛋白质进行进一步的分离。蛋白质在通过双向电泳后在胶面上表现为单个的蛋白点,然后即可对关注的蛋白点扣取进行质谱检测,确定蛋白质的功能以及名称。刘硕等人利用蛋白组学对家蚕蚕蛹的过敏源进行分析,表现出了该方法应用在家蚕蛋白研究上具有样品量比较小,所取得的结果较为直观,且研究周期较短等优势。本次试验采取有兰州威特森公司提供的家蚕蚕蛹。双向电泳的成功关键在于蛋白的纯化效果,主要是对脂肪,盐分等其他影响升压聚焦因素的去除。而蚕蛹是高脂肪且富含大量微量和常量元素的个体,所以对蚕蛹的蛋白提取的纯化研究具有重要意义。本次实验利用普通家蚕蚕蛹为实验材料,采用四种不同的纯化以及蛋白提取方法,4种不同聚焦时间,3种考马斯亮蓝染色法和3种平衡时间对家蚕蚕蛹双向电泳结果的影响。实验结果表明,采用TCA-丙酮法提取的蛋白效率最高, 100000v,90000vh时蛋白纵横条带较少,且蛋白点明显。平衡时间在20分钟时有利于消除纵条纹。而染色液方法则各有优缺点。本项目为家蚕蚕蛹蛋白质组学的研究提供了方法。