【摘 要】
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用限制性内切酶SacI和BamHI双酶切克隆有鸡致病性大肠杆菌分离株O、O和O的piliA基因的质粒pTFimO1、pTFimO2和pTFimO78,分别回收从此3质粒上切下的545bp的piliA基因片段,再将载体pET-28a(+)用SacI和BamHI双酶切,最后将pET-28a(+)DNA片段与545bp的piliA DNA片段进行连接,转化至受体菌BL21(DE3)中,经SacI和Bam
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用限制性内切酶SacI和BamHI双酶切克隆有鸡致病性大肠杆菌分离株O<,1>、O<,2>和O<,78>的piliA基因的质粒pTFimO1、pTFimO2和pTFimO78,分别回收从此3质粒上切下的545bp的piliA基因片段,再将载体pET-28a(+)用SacI和BamHI双酶切,最后将pET-28a(+)DNA片段与545bp的piliA DNA片段进行连接,转化至受体菌BL21(DE3)中,经SacI和BamHI酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pETFimO1、pTFimO2和pTFimO78.重组菌株BL21(DE3)(pETFimO1)、BL21(DE3)(pETFimO2)和BL21(DE3)(pETFimO78)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明重组菌株可以良好地表达鸡致病性大肠杆菌I型菌毛蛋白.
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免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子编嗜性,但与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达
以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.获得3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株2A3、2H1和1C8,其腹水mAb的效价依次为1×10、1×10和5×
本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA蛋白在58、63、68、88、146位都存在糖基化位点;但是,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01在50位存在一糖基
本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW/HLJ/395/01外,其余14株H1N1亚型SIV的NP基因核苷酸序列与参考毒株SW/BJ/94/91保持相对最高的同源性,核苷酸和
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