肥大细胞识别重组FMDV VP1-VP4蛋白信号转导机制的研究

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口蹄疫病毒有7种血清型(A、O、C、Asia 1、SAT1、SAT2、SAT3)及多种亚型,现今我国主要流行A型、O型以及Asia1型。尽管对肥大细胞在抗病毒感染中的作用研究取得了一定进展,肥大细胞在抗FMDV感染中的作用仍不清楚。本研究通过使用MAPK和NF-κB抑制剂,检测小鼠腹腔肥大细胞(PMC)识别重组FMDV VP1-VP4蛋白后分泌IL-6、IL-10和TNF-α的水平,揭示肥大细胞识别FMDV VP1-VP4重组蛋白信号转导途径。本研究收集PMC并加入NF-κB抑制剂和MAPK抑制剂,再加入重组FMDV VP1-VP4蛋白,于负载蛋白后1h、6h、24h和48h收集上清液,用ELISA试剂盒检测细胞因子含量。结果显示,PMC组与PMC+重组蛋白组、PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组上清液中IL-6的含量在6 h均有显著性差异。在24h,PMC组与PMC+重组蛋白组、PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组上清中IL-6含量均有显著性差异。在48h,PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组上清中IL-6含量有显著性差异。而在24h,PMC+重组蛋白组与PMC+iNF-kB+重组蛋白组上清中IL-6含量有差异。IL-10检测结果显示, PMC组与PMC+重组蛋白组在1h有极显著性差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iNF-κB+重组蛋白组有差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组有显著性差异。TNF-α检测结果显示,PMC组与PMC+重组蛋白组在1h有显著差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组有差异。在6h,PMC组与PMC+重组蛋白组组有极其显著性差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组有显著性差异。在24h,PMC+重组蛋白组与PMC+iNF-κB+重组蛋白组有差异。PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组有极其显著性差异。在48h,PMC组与PMC+重组蛋白组有显著性差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iNF-κB+重组蛋白组有极其显著性差异,PMC+重组蛋白组与PMC+iMAPK+重组蛋白组有极其显著性差异。以上结果表明,肥大细胞识别重组FMDV VP1-VP4蛋白可启动NF-κB途径分泌IL-6、TNF-α,也可启动MAPK途径分泌IL-6、IL-10和TNF-α。
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