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目的探讨重组腺病毒HIF-1a(Recombinant adenovirus Containing Hypoxia-inducible Factorlαgene,AdHIF-1α)干预大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用,以及AdHIF-1α对Akt、p-Akt及Bad表达的影响,为阐明AdHIF-1 a的抗细胞凋亡机制提供依据。方法将SD雄性大鼠随机分为:正常对照组(Nomal),假手术组(Sham),局灶性脑缺血再灌注组(CIR),重组腺病毒空载体组(Ad),重组腺病毒HIF-1a干预组(AdHIF-1a)。根据再灌注时间,将各组分为4个亚组,即:6h、24h、48h、72h组;采用线栓法制各局灶性脑缺血再灌注损伤模型。脑部立体定位仪定位侧脑室注射,Normal组及Sham组注射无菌生理盐水,Ad组注射Ad,AdHIF-1a干预组注射AdHIF-1a。模型成功后,按各亚组时间点进行神经功能缺失体征评分;取新鲜脑组织测量梗死侧脑组织脑水含量;行组织冰冻切片证实基因注射进入侧脑室内;TTC染色测量大鼠脑梗死体积百分比:HE染色观察大鼠脑组织的病理学形态改变;免疫组化及Western Bolt法检测Akt,p-Akt,Bad的表达。结果 1.AdHIF-1a干预组大鼠局灶性神经功能缺失体征评分与CIR组、Ad组比较,72h组大鼠神经功能缺失体征评分降低(P<0.05)。2.TTC染色AdHIF-1a干预组大鼠脑梗死体积百分比分别与CIR组、Ad组比较均有显著统计学差异(P<0.01)。3.模型组大鼠脑水含量随再灌注时间延长,其脑水含量逐渐增加,于24h至48h增长速度最快。AdHIF-1a干预组各时间点脑水含量分别与CIR组、Ad组相应时间点比较,除6h外,其余各时间点均有统计学差异(P<0.05)。4.HE染色见AdHIF-1a干预组在脑缺血再灌注72h后神经元病理学改变明显减轻。5.免疫组化法检测Akt、p-Akt、Bad蛋白的表达:各模型组Akt、p-akt、Bad蛋白表达总体趋势相同,即Normal组及Sham组各蛋白为弱表达,各模型组蛋白表达24h达高峰,48h开始下降。(1)Akt、p-Akt蛋白的表达:AdHIF-1a干预组各时间点Akt、p-Akt蛋白表达分别与CIR组、Ad组相应时间点比较,除6h外,其余各时间点Akt蛋白表达均具有统计学差异(P<0.05)。(2)Bad蛋白的表达:AdHIF-1a干预组各时间点Bad蛋白表达分别与CIR组及Ad组相应时间点比较,24h、48h Bad蛋白表达具有显著统计学差异(P<0.01),6h、72h Bad蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。6.Western Bolt法检测Akt、p-Akt、Bad蛋白的表达:该法检测各组Akt、p-Akt、Bad蛋白表达高峰时间同免疫组化法。(1)Akt、p-Akt蛋白表达:AdHIF-1a干预组各时间点Akt、p-Akt蛋白表达与CIR组及Ad组相应时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Bad蛋白表达:AdHIF-1a干预组各时间点Bad蛋白表达分别与CIR组、Ad组相应时间点比较,除72h外,其余各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。以上各检测指标CIR组与Ad组相应时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 1.外源性HIF-1a对大鼠脑局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。2.外源性HIF-1a可能通过上调其下游靶基因VEGF、EPO的表达,继而促使抗细胞凋亡基因Akt表达增加、促凋亡基因Bad表达减少,从而实现大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带神经元的保护作用。