【摘 要】
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目的 为了建立香烟烟雾致体外人支气管上皮细胞恶性改变的细胞模型,研究香烟烟雾染毒诱发恶性转化中相关基因表达和启动子DNA甲基化状况.方法 将人支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞接种于Transwell膜培养皿后置于动态气体染毒装置中进行直接细胞染毒.检测染烟后细胞增殖抑制率确定染烟浓度及时间.染烟2次后将Transwell培养皿中细胞消化下置于培养瓶中常规培养,待生长至对数生长期后进行下一代染烟
【机 构】
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苏州大学医学部公共卫生学院,江苏苏州734855;广岛大学原爆放射线医科学研究所,日本广岛7348553
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目的 为了建立香烟烟雾致体外人支气管上皮细胞恶性改变的细胞模型,研究香烟烟雾染毒诱发恶性转化中相关基因表达和启动子DNA甲基化状况.方法 将人支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞接种于Transwell膜培养皿后置于动态气体染毒装置中进行直接细胞染毒.检测染烟后细胞增殖抑制率确定染烟浓度及时间.染烟2次后将Transwell培养皿中细胞消化下置于培养瓶中常规培养,待生长至对数生长期后进行下一代染烟,共染烟40代.比较对照组细胞、染烟5,10, 15, 20,25,30,35和40代细胞的一般生物学状况,血清抗性实验、锚着独立性生长实验等细胞恶性转化指标.检测各组p16,survivin,RASSF1A和MGMT基因mRNA的表达水平,分析处于恶性转化各阶段中RASSF1A,MGMT,p16,DAPK-1,APC基因启动子特异位点的甲基化状况.结果 随染烟代数的增加,人支气管上皮细胞BEAS2B可发生恶性转化,形态学和生长特性发生明显变化,细胞传代周期由4d缩短为2d,随染烟代数的增加,细胞形态学及生长趋于稳定,表现出类似癌细胞的生长特性.细胞凋亡率明显降低,呈现凋亡抑制状态.对细胞恶性程度的变化分析发现：香烟烟雾染毒至5代时细胞即已获得恶性转化,表现为抗血清生长能力增强,在含10％血清培养基中细胞克隆形成率可达32.34％,同时获得锚着独立生长能力,其克隆形成率可达8.48％.至染毒40代细胞时上述两项指标分别达到97.11％和89.17％,表明该细胞恶性程度已相当高.对照组细胞RASSF1A和MGMT基因无甲基化表达,自染烟5代细胞开始即已开始甲基化表达,至染烟40代细胞一直稳定表达；Survivin基因mRNA在对照组细胞中无表达,随着染毒代数的增加均高表达,呈现剂量效应关系.RASSF1A和MGMT基因mRNA在对照组细胞中高表达,各染烟组细胞mRNA表达水平均显著降低,并呈现剂量依赖性关系.结论 本研究建立了香烟烟雾诱导BEAS-2B细胞体外恶性转化的细胞模型.RASSF1A和MGMT基因启动子区甲基化和表达水平降低可能在香烟烟雾诱导BEAS-2B细胞恶性转化中发挥重要作用并显现出凋亡状态的改变.
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