【摘 要】
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目的 探讨重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶对糖尿病大鼠创面愈合及创面组织中微小RNA(miRNAs)表达的影响.方法：链脲佐菌素一次性腹腔注射法建立糖尿病大鼠模
【机 构】
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330006 南昌大学第一附属医院烧伤研究所,江西省创面修复工程技术研究中心
【出 处】
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2014感染伤口的防治与修复研讨会、中国金属学会冶金安全与健康分会烧伤外
科学专业委员会年会、华北地区烧伤与整形外科学术
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目的 探讨重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶对糖尿病大鼠创面愈合及创面组织中微小RNA(miRNAs)表达的影响.方法：链脲佐菌素一次性腹腔注射法建立糖尿病大鼠模型；4周后取糖尿病成模大鼠16只,于背部分别制备4个全层皮肤切除创面；采用配对设计,将rhGM-CSF凝胶治疗组设为A组,基质对照组设为B组,两组均每日换药1次,至术后14天.术后第3、7、14天,大体观察各组创面愈合情况并计算创面愈合率,并于此各时间点采集标本进行组织学检测,免疫组织化学检测指标为PCNA、CD31.术后第7天采集组织样本行miRNAs检测,采用Trizol法抽提总RNA,质检合格后纯化；然后进行荧光标记、芯片杂交；清洗芯片后用芯片扫描仪进行扫描,得到杂交图片；利用Feature Extraction软件对杂交图片进行分析并提取数据；用Agilent GeneSpring软件进行数据归一化及差异分析；实时定量RT-PCR验证芯片结果.结果：与基质对照组相比,rhGM-CSF凝胶治疗组创面肉芽更健康、旺盛,表皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞增殖更明显,炎症细胞浸润更多,坏死组织及炎性渗液更少,愈合速度更快,在第3、7天时两组创面愈合面积差异均有统计学意义.各时间点rhGM-CSF凝胶治疗组的PCNA及CD31阳性表达更明显,阳性细胞平均光密度值与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).miRNAs芯片检测共筛选出了3 1个差异表达的miRNAs,其中在rhGM-CSF凝胶治疗组中表达上调的有18个,下调的有13个.实时定量RT-PCR的验证结果与芯片检测结果具有较好的一致性.结论：外用rhGM-CSF凝胶能促进创面愈合,提高愈合质量.经rhGM-CSF凝胶干预后,糖尿病大鼠皮肤创面组织中的miRNAs存在明显差异性表达,可能是rhGM-CSF凝胶促进创面愈合在基因转录后水平上的靶点,并有可能为进一步靶向治疗提供理论依据和实验基础.
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