【摘 要】
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目的 探讨ARHI蛋白对肝细胞癌血管生成的影响及其相关机制.方法 以人肝组织总RNA为模板通过RT-PCR获取全长ARHIcDNA.该序列被克隆并构建pcDNA3.1-ARHI表达质粒.将pcDNA3.
【出 处】
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中华医学会2012年第十三届中华肝胆胰脾外科专业学术论坛
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目的 探讨ARHI蛋白对肝细胞癌血管生成的影响及其相关机制.方法 以人肝组织总RNA为模板通过RT-PCR获取全长ARHIcDNA.该序列被克隆并构建pcDNA3.1-ARHI表达质粒.将pcDNA3.1-ARHI表达质粒转染人肝细胞癌细胞系Hep3B细胞,通过G418筛选稳定表达ARHI的细胞.分别用稳转空载体和ARHI的Hep3B细胞接种建立裸鼠人肝细胞癌移植瘤模型,每周测量瘤体积；5周后麻醉处死裸鼠；免疫组化法检测增殖细胞核标志物Ki-67和血管内皮细胞标志物CD31的表达.应用Western blotting法检测血管生成相关的mTOR通路中mTOR下游靶蛋白S6K1和4E-BP1的磷酸化情况,并检测肿瘤组织血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 ARHI对裸鼠人肝癌移植瘤有明显的生长抑制作用,ARHI组瘤体显著减小(P＜0.01)；免疫组化检测显示,ARHI显著抑制细胞增殖核抗原蛋白Ki-67 (P＜0.01)和血管内皮细胞标记物CD31 (P＜0.05)的表达.Western blot法检测显示,ARHI显著抑制S6KI(P＜0.01)和4E-BP1 (P＜0.05)的磷酸化,而且抑制肿瘤组织中HIF-1α(P＜0.05)和VEGF蛋白(P＜0.01)的表达.结论 过表达ARHI抑制肝细胞癌生长和血管生成,这可能与其抑制mTOR/VEGF通路有关,并提示过表达ARHI可能成为肝细胞癌治疗的新方法.
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