酶法制备黄嘌呤氧化酶抑制肽的工艺研究

来源 :第147场中国工程科技论坛——轻工科技发展论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rockwjm
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  本研究选用木瓜蛋白酶、Alcalase和胰酶分别对几种不同的食源性蛋白(青蛙肉、红三鱼、草鱼、蓝圆碜)进行酶解,发现用木瓜蛋白酶水解红三鱼所得的酶解产物对黄嘌呤氧化酶(XOD)的半数抑制浓度(IC50)最小(3.21 mg/mL),说明其对XOD的抑制作用最强。在此基础上进一步优化其酶解条件,测定不同酶底比、温度、酶解时间和pH值条件下红三鱼酶解产物对XOD的IC值,结果表明木瓜蛋白酶水解红三鱼的较优条件为酶底物浓度[E/S]0.20%、温度50℃、酶解时间5 h、pH7.0,此酶解条件下产物对XOD的半数抑制浓度最低(IC50=1,95 mg/mL)。利用DEAE-Sepharose离子交换柱层析对较该酶解液进行分离纯化,其中以0.1 mol·L-1 NaCl溶液洗脱得到的组分抑制活性最强(IC50=0.23 mg/mL)。通过高效液相色谱法测定该酶解产物的分子量分布结果可知,该酶解物中分子量<1 000 Da的组分含量为12.44%;大于10 000 Da的片段仅占5.72%;而1 000~5 000Da的肽段组分含量最高,占52.72%,说明该酶解物以肽类组分为主。
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