【摘 要】
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Objective To construct the RNAi retroviral vector of 14-3-3σ and establish the stable transfected HaCat cell lines.Methods Hairpin siRNA of 14-3-3σ were chemically synthesized and inserted into pSuper
【机 构】
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Department of of Radiation Medicine, Public Hygiene and Tropical Medicine School, Southern Medical U
【出 处】
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第七届中国核学会“三核”论坛暨中国毒理学会放射毒理委员会第八次全国会议
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Objective To construct the RNAi retroviral vector of 14-3-3σ and establish the stable transfected HaCat cell lines.Methods Hairpin siRNA of 14-3-3σ were chemically synthesized and inserted into pSuper retro-neo-EGFP plasmid.PSuper-retro-neo-EGFP-si14-3-3σwere transformed into competent STBL3 cells to amplification.Then the positive clones were confirmed by sequencing and transfected into the packaging 293FT cells to generate, amplificate and depurate virus.HaCat cells were infected with the recombinant retroviral vector and the expression of 14-3-3σwas detected by Western blot and real time PCR.Results The recombinant retroviral plasmid PSuper-retro-neo-EGFP-si14-3-3σ was successfully constructed, and green fluorescence of the stable transfected HaCat cell lines could be observed under inverted fluorescence microscope.The results of western blot and real time PCR showed that the sequence of RNAi-14-3-3σcould effectively down-regulate the level of 14-3-3.Conclusion We have successfully constructed the RNAi retroviral vector targeting 14-3-3σand have established stably transfected HaCat cell lines.
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