唑类抗真菌药物，尤其氟康唑是目前治疗念珠菌病的常用药，白念珠菌(Candida albicans，以下简称白念)是念珠菌病最主要的致病菌。氟康唑对白念的作用靶酶是羊毛甾醇14α-去甲基酶(14DM)，属于细胞色素P450家族，由白念ERG11基因编码，由528个氨基酸构成。唑类药物分子与14DM结合后，可以阻断羊毛固醇去甲基化过程，影响麦角固醇合成。ERG11基因突变，能够改变下游蛋白产物14DM空间构象，使靶酶对氟康唑分子亲和力降低导致耐药。已知的白念ERG11点突变中，仅T541C、A1090G、C1361T、G1537A、G1547A、T1559C等6处已被证实可以导致菌株耐氟康唑。 目的：实验分析白念临床株的氟康唑药物敏感性；筛查临床菌株的ERG11突变，探讨其与耐药的关系。 方法：(一)跟踪念珠菌感染的患者，分离菌株，经37℃血清培养芽管试验、25℃玉米土温琼脂小培养厚壁孢子形成试验、蔗糖同化试验及TTC还原试验，鉴定其中的白念(含都柏林念珠菌)，经25S核糖体DNA(25S rDNA)转座内含子保守序列PCR-凝胶电泳，鉴定都柏林念珠菌并对白念进行种内分型。(二)运用微量稀释法和药敏纸片法两种方法，体外测定氟康唑对试验菌株的MIC，确定敏感株、剂量依赖敏感株和耐药株。(三)采用酵母基因组DNA提取试剂盒(OMEGA)，经破壁-裂解-洗涤-洗脱四步，提取试验菌株基因组DNA。在紫外分光光度计上测DNA溶液OD260和OD280，计算OD260/OD280比值，估计纯度，计算浓度。(四)设计合成三对引物分别扩增ERG11基因的第295-777bp(483bp)、第723-1204bp(482bp)、第1179-1667bp片段(489bp)等3个片段，并测序。 结果和讨论：共收集菌株80株，分离白念52株。白念对氟康唑敏感率为100%。经测序的5株白念敏感株ERG11基因出现19处突变，其中14处为同义突变，另外的T495A、A530C、G640A、A945C、G1609A分别可引起编码蛋白的下列氨基酸突变D116E、K128T、E165K、E266D、V488I。据以往报道，E266D、D116E、K128T均可在敏感株中出现，因而与耐药无关。V488I远离活性中心，推测其与耐药关系不密切。E165K迄今未见文献报道，E165为真菌和哺乳动物共有的保守氨基酸，因其在靶酶中的位置距离血红素和I螺旋均较近，曾有学者猜想E165Y突变可能与耐氟康唑和伊曲康唑有关，但并未经试验证实。在我们的试验中，敏感株02928同时出现E165K、E266D、V488I三个突变点，提示E165K和V488I不能导致菌株耐氟康唑。 结论：白念临床分离株对氟康唑敏感性较高；白念氟康唑敏感株可以出现新突变G640A(E165K)；E165位点的突变和V488I可能不引起耐药。