【摘 要】
：
本文将从表达重组P450s的宿主细胞及表达质粒、N-末端修饰、培养宿主温度与周期、分子伴侣共表达和纯化重组细胞色素酶P450s方法等方面对用E.coli表达人源P450s的近期进展进行综述.得出：细胞色素酶P450，能够催化各种内源性和外源性物质包括药物、致癌物和其他异源化学物质的氧化代谢。基于这种性质，P450s在医学和生物技术领域具有广泛的应用前景，可以作为药物靶点和药物生物合成及开发药物的新
【机 构】
：
广州军区广州总医院,广东广州510010;南方医科大学,广东广州510515 广州军区广州总医院,
论文部分内容阅读
本文将从表达重组P450s的宿主细胞及表达质粒、N-末端修饰、培养宿主温度与周期、分子伴侣共表达和纯化重组细胞色素酶P450s方法等方面对用E.coli表达人源P450s的近期进展进行综述.得出：细胞色素酶P450，能够催化各种内源性和外源性物质包括药物、致癌物和其他异源化学物质的氧化代谢。基于这种性质，P450s在医学和生物技术领域具有广泛的应用前景，可以作为药物靶点和药物生物合成及开发药物的新诱导剂等。而体外重组人P450s为其提供了能够纯化的单一酶系。大肠杆菌表达系统具有耗费低、表达周期短及表达水平高等优点而被广泛应用于表达重组人源P450s。重组人P450s在E.coli中的表达水平受多种因素，如宿主和表达质粒的不同、N-末端修饰、分子伴侣共表达、温度效应等。其中N-末端的修饰有两种形式，一种是经典的MALLLAVFL序列，另一种是截断P450 N-末端膜锚点序列。截短修饰使重组P450在大肠杆菌的胞质中分布增加，P450 N-末端膜锚点的去掉使得P450与膜结合困难，也使P450的溶解性增高。这两种修饰都被证明不明显改变P450s的酶催化性质，且大大增加了重组P450s在大肠杆菌中的表达水平。除此之外，大肠杆菌培养基中是否加入血红素前体δ-氨基乙酰丙酸（δ-ALA）也会影响重组酶P450的表达水平。Richardson等对δ-ALA对重组P450 2C表达水平的影响进行了研究，结果显示，添加δ-ALA的重组P450 2C9、2C18、2C19表达水平分别从220、200、200nmol/l增加到500、450、700nmol/l。用E.coli表达重组人P450s已经得到了很大的发展，各种表达条件不断优化使其应用前景越来越广泛。在NADPH-P450还原酶与P450s共表达在大肠杆菌中后，大肠杆菌系统作为P450s整体反应体系成为可能．
其他文献
本文的目的是利用大鼠研究糖尿病皮肤对脂溶性的醋酸地塞米松(DA)和水溶性的地塞米松磷酸钠(DSP)经皮渗透和吸收作用的影响.在研究中采用了病理学方法观察糖尿病皮肤的病理改变,还同时引进了改良型Franz扩散池及微透析来评价上述两种药物的经皮渗透及吸收,并采用了高效液相或者液质联用的方法测定样品中DA和DSP的含量.结果表明,与正常大鼠相比,DA经糖尿病皮肤的渗透和吸收量无明显变化,而DSP经糖尿病
目的：比较三七总皂苷(PNS)与比索洛尔对急性心肌梗塞(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠心功能作用.方法：除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随机分为对照组和实验组,连续4w分别灌胃给予生理盐水2mg.kg-1、比索洛尔25mg.kg-1和PNS40、80、120 mg·kg-1,观察PNS和比索洛尔对病鼠室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左室舒张末期内径(宽
目的:探讨哈蟆油(oR)对D-半乳糖所致雌性衰老大鼠肝脏组织p16、p21和cyclinD1蛋白表达的影响,进一步探讨OR延缓雌性大鼠机体衰老机制.方法：SPF级SD雌性青年大鼠40只随机分为模型组(D-gal组)、维生素E(VE组)、哈蟆油高剂量组(OR-H组)、中剂量组(OR-M组)、低剂量组(OR-L组),每组8只,D-半乳糖颈背部皮下注42d,建立亚急性衰老模型.另取雌性青年大鼠8只,同样
目的：研究芹菜素与柚皮素分别经大鼠空肠、回肠与结肠黏膜的体外区段透过特征.方法：采用体外垂直扩散池(Ussing Chamber)方法,分别评价50 μmol·L-1芹菜素及柚皮素经空肠、回肠和结肠黏膜经时(O～120min)吸收方向(M-S)与分泌方向(S-M)的累计透过率,并通过体系稳态时间(60min-120min)的累计透过率计算各区段吸收方向与分泌方向的表观渗透系数(Papp).芹菜素与
Purpose:The aim of this study was to test the ability of paclitaxel-loaded poly(butyl) cyanoacrylate (PBCA) nanoparticles to overcome multidrug resistance (MDR) in human ovarian resistant cells (A2780
Bone marrow mesenchyrnal stem cells (BMSC) can differentiate into diverse cell types,including adipogenic,osteogenic,chondrogenic and myogenic lineages.There are lots of BMSC accumulated in atheroscle
目的:探讨复方姜黄合剂对糖尿病大鼠视网膜新生血管的干预效果,并研究其剂量一疗效的关系.方法:STZ(链脲佐菌素)诱导糖尿病大鼠成功后,实验鼠随机分为合剂低剂量组、合剂中剂量组、合剂高剂量组、模型组、羟苯磺酸钙组,并设正常对照组.合剂组和羟苯磺酸钙组分别用复方姜黄合剂和羟苯磺酸钙,模型组和对照组用等容量蒸馏水灌胃.20周后,将实验大鼠处死.取眼球行视网膜消化铺片,观察血管形态,微血管数目,计算每高倍
Backbround:Venlafaxine is a new antidepressant that has a chemical structure and neuropharmacologic profile distinct from those of existing antidespressants.The studies about the mechanism of pharmaco
The amyloid precursor protein (APP) is cleaved enzymatically by nonamyloidogenic and amyloidogenic pathways.α-Secretase cleaves APP within β amyloid protein (Aβ) sequence,resulting in the release of a
A new and simple high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector (HPLC-ELSD) method for determination of Kryptofix 2.2.2 (K-222) in the radiopharmaceuticals of 2-deoxy-2-[