【摘 要】
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本研究从山东株柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子RNA中反转录扩增得到EtMIC2基因全序列,进一步扩增得到EtMIC2 CDS序列将其克隆到pJETl.2载体后,酶切得到EtMIC2片段,克隆到pPIC9真
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究从山东株柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子RNA中反转录扩增得到EtMIC2基因全序列,进一步扩增得到EtMIC2 CDS序列将其克隆到pJETl.2载体后,酶切得到EtMIC2片段,克隆到pPIC9真核表达载体,阳性质粒用SacⅠ线性化后转染毕赤酵母GSll5,PCR筛选表达重组子.经过BMGY培养、BMMY诱导表达,获得分泌表达到上清中的重组蛋白His-EtMIC2.经镍柱纯化浓缩重组蛋白免疫实验兔,获得兔抗EtMIC2蛋白多克隆抗体.应用制备血清做间接免疫荧光实验检测酿酒酵母表面展示EtMIC2蛋白.结果显示,成功用GSll5酵母表达了EtMIC2蛋白,并且,以该蛋白制备的多抗也具有免疫学活性.本研究为进一步研究EtMIC2蛋白的生物功能及和其它入侵因子的相互作用奠定了基础.
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