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目的：通过焦磷酸测序法(Pyrosequencing)检测结直肠癌中K-ras基因突变，并分析其临床病理学意义。方法：从67例结直肠癌石蜡标本中提取基因组DNA，设计一对PCR引物和一条测序引物，采用焦磷酸测序法分析结直肠癌中K.ras基因的突变情况。结果：K-ras基因突变率为38.8％(26/67)。共发现6种突变类型，包括12密码子(GGT-GAT、GGI-GTT、GGT-TGT、GGT-AGT、GGT-GCT)和13密码子(GGC-GAC)。57.7％的K-ras基因突变发生于12密码子的第2位碱基，且12密码子(GGT-GAT)最多见(30.8％)。女性患者K-ras基因突变率高于男性(P=0.012)；有淋巴结转移组K-ras基因突变率高于无淋巴结转移组(P=0.048)。K-ras基因突变与年龄、肿瘤位置、浸润深度、组织学类型及Dukes分期无关。除性别差异有统计学意义(P=0.017)外，K-ras基因12密码子突变(包括第1位碱基和第2位碱基突变)与其他临床病理指标无关。结论：焦磷酸测序法适用于结直肠癌中K-ras基因突变的快速检测，K-ras基因突变与淋巴结转移相关，有望成为重预后指标。