gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

来源 :中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sam008
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为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG混合物共转染293FT细胞,获得含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-m iR-21的细胞株DF-miR-21,用qRT-PCR检测gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高了60%.将IBDV接种到DF-miR-21细胞,在96 h后,病毒滴度为10475 TCID50/0.1 mL,而正常DF-1细胞的病毒滴度为108.75 TCID50/0.1mL.用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组B片段上具有gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染的DF-miR-21细胞,用western-blot分析,VP1蛋白的表达量较正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上(VP1蛋白的合成)而不是在转录水平上(VP1mRNA的转录)实现的.
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