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目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白(HSP70)表达,探讨益气逐瘀法组方参元丹(SYD)的药理性预适应作用及其机制。
方法:选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只,雌雄各半,体重274±42 g,鼠龄4月左右,随机分为6组,分别为对照组,再灌注组,假性缺血预处理组,缺血预处理组,药物预处理+缺血预适应组,药物预处理组,每组10只。分别造模、取血、取心肌组织。将心肌组织浸入10[%]甲醛溶液固定,脱水,封蜡,切片,染色。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。将所取血液离心后取血清,应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。
结果:彩色病理图像分析SYD能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用。PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达。PKC在缺血预处理组、药物预处理+缺血预处理组及药物预处理组的大鼠心肌组织中表达充分,提示PKC在大鼠的预适应样心肌保护作用过程中可能发挥作用。缺血预处理组大鼠心肌组织中PKC有大量表达;药物预处理组的大鼠心肌组织中表达充分,视野下PKC表达的数量多,经典的阳性表达形态完好。提示缺血预处理与SYD均具有独立的药预适应样的心肌保护作用,能减少梗死面积和减轻其程度;药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC有大量表达,与缺血预处理组数量无明显差异;不能排除SYD与缺血预处理在心肌保护方面具有协同作用,并得到充分发挥。Hsp70在对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达。药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,考虑HSP70的表达与SYD的作用相关,SYD可能具有促进HSP70早期表达的作用,这种作用可以在缺血预适应条件下得到强化,从而使预适应心肌保护作用得到强化。
结论:SYD具有药理预适应样作用;SYD预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关;SYD可能促进HSP70在早期表达;SYD预适应可以与缺血预适应协同发挥心肌保护作用。