GH10家族双功能木聚糖酶/纤维素酶的非催化残基在底物催化中的作用研究

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嗜热厌氧菌Caldicellulosiruptor bescii来源的CbXyn10C/Cel48B是一个多结构域蛋白,其N端和C端分别注释为木聚糖酶和纤维素酶。在前期研究中,我们发现CbXyn10C/Cel48B的N端CbXyn10C蛋白自身也是一个双功能酶,能同时水解木聚糖和纤维素底物,如大麦葡聚糖、微晶纤维素、酸溶胀纤维素和羧甲基纤维素钠等1。但是,其底物杂泛性的分子机制目前尚未被阐明。通过ITC实验,发现CbXyn10C至少含有6糖的结合位点,并测定了对不同寡糖的催化效率。通过结晶或分子对接及动力学模拟的方法,我们分别获得了CbXyn10C与木寡糖或纤维寡糖的复合物结构。CbXyn10C含有GH10家族典型的(β/α)8桶状结构和"salad-bowl"结构。在与木寡糖的复合物结构中,发现CbXyn10C能结合7个木糖单元。对与寡糖相互作用的残基位点的突变分析发现,对酶活起关键作用的氨基酸残基多集中在邻近切割位点的-2和-1位,而对酶活影响较小的氨基酸残基多分布在结合口袋的远端区域。通过序列比对发现,对纤维素酶活关键的氨基酸残基在GH10家族木聚糖酶中是保守的,随机挑选几个GH10家族木聚糖酶发现均能检测出纤维素酶活,提示在GH10家族中双功能酶的现象比想象的要更普遍。
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