【摘 要】
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根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamHⅠ将H片段切下并回收后克隆到BamHI/EcoRⅤ双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测定.免
【机 构】
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成都军区联勤部军事医学研究所,云南,昆明,650032 解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamHⅠ将H片段切下并回收后克隆到BamHI/EcoRⅤ双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测定.免疫质粒经纯化后对5只犬进行免疫,以空质粒为阴性对照,8w接种一次,每次接种前采血,测定血清的抗体效价,在第三次接种4w后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7d及14d时采血,测定血清的抗体效价.接种pIRCDV-H疫苗的犬,两次免疫后即可产生较高的抗体水平,攻毒后大部分能抵抗CDV强毒的攻击,虽有发病,但症状较轻,而接种空质粒的对照犬发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗CDV强毒的攻击。
其他文献
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根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计两对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR方法.试验中未能检出弱毒力NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性.经验证,复合引物与单一引物的扩增
将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1.rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Western
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的
基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型禽流感病毒.从核酸提取、基因扩增到产物分析在3-4小时内完成.采用所建立的RT-PCR和多重RT-PCR,分析36株禽流感及相关病毒分离物,其结果与传统病毒分离鉴定完
以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳定分泌抗血凝素特异性HI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4CB、BBA.两株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的
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对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究.pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用100LD50的HPAIVA/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,
以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定.6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空质粒及生理盐水,8w接种一次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制效价,第二次免疫后即可检测到较高的血清效