【摘 要】
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呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原体,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP6蛋白由S8基因片段编码,NS38蛋白是由S9片段编码.VP6蛋白在病毒的转录与复制及病毒核衣壳的形成中起重要作用,且有弱的dsRNA结合能力,且其中和效价强.本研究提取了GCRV 096病毒的基因组RNA,通过RT-PCR扩增vp6和NS38两个基因,获得了其全基因
【机 构】
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广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学与流行病学重点实验室 广东湛江524025
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呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原体,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP6蛋白由S8基因片段编码,NS38蛋白是由S9片段编码.VP6蛋白在病毒的转录与复制及病毒核衣壳的形成中起重要作用,且有弱的dsRNA结合能力,且其中和效价强.本研究提取了GCRV 096病毒的基因组RNA,通过RT-PCR扩增vp6和NS38两个基因,获得了其全基因序列,vp6的ORF为1239bp,NS38的ORF为1056bp.将vp6和NS38分别与pET载体相连,构建原核表达载体,并将重组表达载体导入大肠杆菌BL21 (DE3)进行原核表达.在优化表达条件下,获得体外表达蛋白,对表达结果进行分析,为进一步研究草鱼呼肠孤病毒免疫学特性奠定基础.
其他文献
提取草鱼肝脏总RNA,采用RT-PCR和RACE方法扩增草鱼乙酰辅酶A羧化酶(ACC)基因的核心序列、3′末端和5′末端序列,克隆测序,将各片段序列组装得到草鱼ACC基因全长cDNA序列,并对所得到的序列进行生物信息学分析.结果表明,草鱼ACC基因的全长cDNA序列共7433bp,开放阅读框共7071bp,共编码2357个氨基酸.推测前28个氨基酸构成一个信号肽,编码的蛋白是非分泌蛋白,蛋白分子量
角蛋白属于中间纤维蛋白按表达类型分可分为E型角蛋白和S型角蛋白.含有S型角蛋白的上皮组织有上皮细胞、前肾管、消化管、脊动脉管、皮肤等.角蛋白18属于S型角蛋白.通过对稀有鮈鲫的角蛋白18基因的克隆及序列分析,旨在从分子水平上了解角蛋白18的特性.根据已发表的斑马鱼的角蛋白18氨基酸序列与人、爪蟾的氨基酸序列进行同源性比较得到的保守序列在斑马鱼中找到相关DNA序列从中设计二对引物,得到2779bp的
早期的研究中,我们报道了从冬季和夏季鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)的快速肌中分离到两种肌球蛋白重链同工型基因,分别命名为低温型(sc-w)和高温型(sc-s).本文根据该两种同工型基因在3 ′端展现的明显差异,设计了2个特异性的反向引物,以鲤科鱼类肌球蛋白重链5′端的保守序列为正向引物,通过Long-PCR对编码鲢鱼两种肌球蛋白重链同工型的球状结构域(Subfrag
采用每4个雄性亲本与1个雌性亲本交配的巢式设计方法,建立哲罗鲑(Hucho taimen)9组母系半同胞、34个父系全同胞家系,19个家系置于(13±1.5)℃(高温)、15个家系置于(9±1.5)℃(低温)条件下饲养,计算幼鱼各月龄的体质量和体长性状的遗传力和遗传相关.结果表明,哲罗鲑幼鱼在低温条件下体质量遗传力为0.413～0.675,体长遗传力为0.297～0.777,高温条件下体质量遗传力
实验测定了两种规格(27.0±2.0、12.0±2.0g)野生克氏原螯虾的肌肉生化成分、消化酶和免疫酶活性等.结果表明：大规格虾的肌肉以及除肌肉外其它部分的能量均高于小规格虾,肌肉中天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸的含量均高于小规格虾；肝胰脏和肠道内蛋白酶、淀粉酶活力随pH值的增大均呈现先上升后下降的规律变化,两种规格虾肠道中蛋白酶和淀粉酶以及小规格虾肝胰脏中淀粉酶的最适pH均为7.2,而小规格虾肝胰脏中
向短蛸(Octopus ocellatus)血淋巴中加入不同浓度的甲硫氨酸脑啡肽(met-Enkephalin,met-ENK)后,采用生化方法测定了短蛸血清和血细胞中酸性α-醋酸萘酯酶(α-Naphthy Acetate Esterase,ANAE)和甲硫氨酰氨肽酶(methionineaminopeptidases,MetAP)的活力.结果表明：实验组血清ANAE活力均低于对照组,ANAE活力
研究已证实杆状病毒可以进入各种脊椎动物细胞,包括哺乳动物细胞,禽类细胞,以及鱼类细胞。由于杆状病毒能高效转导哺乳动物细胞,在疫苗研究,基因治疗,以及基因功能研究方面都有一定应用,现已成为一种新型的基因导入载体。然而研究发现,杆状病毒转导鱼类细胞系效率低下,这就阻碍了杆状病毒在鱼类细胞中 的应用。本研究构建了重组杆状病毒Bac-CMV-EGFP,以CMV为启动子,EGFP为报告基因。用重组杆状病毒转
2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验,结果发现攻毒鱼大量死亡且出现典型出血症状
从近海区生态环境样品分离纯化的98株微生物中,用根癌农杆菌平板筛选模型经过初筛和复筛,筛选出具有细菌群体感应干扰活性的微生物细菌ZD 27,并对其进行形态、生理生化特性和16S rDNA分子鉴定,在此基础上考察其水解酶活特性和热稳定性。结果显示,该菌株具蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的典型特征,其16S rDNA序列通过比对分析,与GenBank中蜡样芽孢杆菌的16S rDNA的部
一株从锯缘青蟹中分离的呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus,简写为SsRV),基因组为13个节段的双链RNA.通过电子显微镜观察结果表明：完整的病毒粒子直径为70nm,与呼肠孤科其他已知病毒粒子大小一致.由于经过蔗糖密度梯度纯化,病毒粒子失去外层衣壳,直径约为55nm(比其他呼肠孤科的完整病毒粒子略小).病毒粒子形态和基因序列分析证明SsRV属于呼肠孤病毒科.SsRV RNA