【摘 要】
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为构建犬新孢子虫AMA1基因的真核表达重组质粒,了解其在体外的表达情况.本试验采用RT-P-CR方法扩增牛源犬新孢子虫吉林株AMA1全长基因,构建了真核表达重组质粒PVAX1-NcAMA1；利
【机 构】
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延边大学农学院动物医学系 吉林延吉 133002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为构建犬新孢子虫AMA1基因的真核表达重组质粒,了解其在体外的表达情况.本试验采用RT-P-CR方法扩增牛源犬新孢子虫吉林株AMA1全长基因,构建了真核表达重组质粒PVAX1-NcAMA1；利用脂质体介导转染法将该重组质粒转染至Vero细胞,应用间接免疫荧光检测方法(IFAT)和western blot技术检测AMA1基因在Vero细胞中的表达.结果显示,扩增的吉林株牛源犬新孢子虫AMA1基因长度为1695bp,与GenBank中相应基因序列(AB265823.1)同源性为99.9％.成功构建了真核表达重组质粒PVAX1-NcAMA1,IFAT检测NcAMA1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,表达产物经western blot鉴定,其分子量约为68kDa,且具有较好的反应原性.本试验为新孢子虫核酸疫苗的进一步研究打下了基础.
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