【摘 要】
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首次对犬冠状病毒大熊猫株(CCVDXMV)核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.本实验根据GenBank中报道的CCVlnsavc-1株N蛋白基因序列,设计了一对特异性引物,对分离的CCVDXMV野毒株进行了RT-PCR扩增.将扩增的PCR产物纯化回收后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN,进行核苷酸序列测定.结果该基因全长1146bp,编码382个氨基酸;与CCV标准毒株lnsavc-1N基因相
【机 构】
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军事医学科学院11所,长春,130062 吉林农业大学动物科技学院,长春,130118
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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首次对犬冠状病毒大熊猫株(CCVDXMV)核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.本实验根据GenBank中报道的CCVlnsavc-1株N蛋白基因序列,设计了一对特异性引物,对分离的CCVDXMV野毒株进行了RT-PCR扩增.将扩增的PCR产物纯化回收后与pGEM-T连接得到重组质粒pTN,进行核苷酸序列测定.结果该基因全长1146bp,编码382个氨基酸;与CCV标准毒株lnsavc-1N基因相比,核苷酸的同源性为92.6﹪,推导的氨基酸的同源性为93.2﹪.在推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒N蛋白相应区域相同,推测可能是RNA结合区.预测的DXMV株N蛋白疏水性和抗原表位与Insavc-1株N蛋白存在细微的差异.将pTN双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETN,转化大肠杆茵BL21,用IPTG进行了诱导表达.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为48000的重组蛋白,兔疫印迹法证实该重组蛋白可以与CCV多克隆抗体发生特异性反应.经凝胶薄层扫描分析,重组N蛋白表达量可占菌体蛋白的49.3﹪,表达的蛋白纯化后可用于建立检测大熊猫CCV抗体间接ELISA用的包被抗原。
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根据GeneBank中猪IFN-γ基因设计引物对,利用RT-PCR技术克隆并测定了猪外周血白细胞IFN-γ基因,定名为poIFNR1,其ORF长度为501个核苷酸,其成熟肽包含144个氨基酸.将其成熟肽基因序列根据大肠杆菌密码子的偏嗜性改造后克隆入原核表达载体pBV220中,鉴定后筛选表达重组菌进行发酵培养、温度诱导后,收集菌体超声波破碎后提取包涵体并进行初步纯化,利用胱氨酸-半胱氨酸再氧化法对纯
猪增生性肠炎(PPE)是由细胞内劳森菌(LI)引起的一种猪常见的接触性肠道传染病.临床症状主要表现为间歇性下痢,食欲减退,生长速度减缓,饲料利用率明显下降等.对PPE的病原学、发病机理、流行病学、临床症状、诊断及综合防制等方面进行了介绍.
应用胸膜肺炎放线杆菌套式PCR和实时荧光PCR检测方法分别检测了不同来源的猪鼻拭子、肺、扁桃体等494份样品.套式PCR77份阳性,实时荧光PCR62份阳性,前者的阳性完全覆盖了后者的阳性,两者符合率为97﹪(479/494).两种方法均可应用于猪传染性胸膜肺炎的诊断和监测.
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根据胸膜肺炎放线杆菌的外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣA基因和荚膜多糖cp2基因设计特异性引物7对,进行三次PCR,将16株参考菌株进行血清分型.采用针对apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ基因的5对引物进行一次多重PCR,采用针对apxⅣA基因的一对引物以及cp2基因的一对引物分别进行一次PCR.通过5对引物的复合PCR能将15个血清型分成5组,其中第一组包括血清1型、5a型、5b型、9型、
目的:检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和耶尔森菌强毒力岛(HPI).方法:对分离的猪源大肠杆菌采用PCR的方法,检测LEE核心区的ler和eaeA基因和HPI的irp2和fyuA基因,并对LEE和/或HPI大肠杆菌进行了O血清型的鉴定.结论:2.7﹪的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7﹪的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大
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本文对新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原(ETEC)致病因子进行了研究。文章采用固相、比色的套式PCR方法，成功地从临床标本粗提物中检测出ST,a和ST,b基因，扩展了PCR的应用。
本文对伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的构建及检测技术进行了研究。文章围绕PRV-PPV-JEV检测基因芯片靶基因克隆及鉴定、PRV-PPV-JEV检测基因芯片的构建、PRV-PPV-JEV检测基因芯片检测技术进行了论述。
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