【摘 要】
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目的：在氢醌诱导TK6 恶性转化细胞和苯暴露工人中,揭示DNMT1 在激活lncRNA UCA1 表达过程的DNA 甲基化机制.方法：以正常的TK6 淋巴母细胞和氢醌诱导TK6 恶性转化细胞、苯暴露工人作为研究对象,反转录实时荧光定量PCR 检测UCA1 的表达；CRISPR/CAS9 双载体慢病毒转染系统构建DNMT1、DNMT3b 敲除细胞；蛋白质免疫印迹检测蛋白表达；甲基化特性PCR(MSP
【机 构】
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广东医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生实验室,东莞 佛山职业病防治所,佛山
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：在氢醌诱导TK6 恶性转化细胞和苯暴露工人中,揭示DNMT1 在激活lncRNA UCA1 表达过程的DNA 甲基化机制.方法：以正常的TK6 淋巴母细胞和氢醌诱导TK6 恶性转化细胞、苯暴露工人作为研究对象,反转录实时荧光定量PCR 检测UCA1 的表达；CRISPR/CAS9 双载体慢病毒转染系统构建DNMT1、DNMT3b 敲除细胞；蛋白质免疫印迹检测蛋白表达；甲基化特性PCR(MSP)检测UCA1 启动子甲基化状态.结果：与对照组相比UCA1 在苯暴露人群中表达上升,并且与苯暴露时间呈正相关关系.在氢醌短期处理的正常TK6 淋巴母细胞中,UCA1 的表达随处理时间而逐渐上升.UCA1 在氢醌诱导TK6 恶性转化细胞中表达上升,DNA 甲基转移酶抑制剂(5-AzaC)或组蛋白去乙酰化酶抑制(TSA)处理氢醌诱导TK6 恶性转化细胞后,UCA1 表达上升得更为明显.而DNMT1、DNMT3b 与UCA1 的表达相反,它们在氢醌短期处理的TK6 淋巴母细胞中表达均为逐渐下降,用5-AzaC 和TSA 处理氢醌诱导TK6 恶性转化细胞后DNMT1、DNMT3b 的表达也均为下降.与DNMT1 和DNMT3b 一致的是,UCA1启动子甲基化水平在氢醌短期处理的TK6 淋巴母细胞和氢醌诱导TK6 恶性转化细胞中均下降,在用5-AzaC 和TSA 处理氢醌诱导TK6 恶性转化细胞后,UCA1 的启动子甲基化程度也明显下降.更为关键的是,在氢醌诱导TK6 恶性转化细胞中敲除DNMT1或DNMT3b 后,UCA1 的表达在敲除DNMT1 的TK6 恶性转化细胞中的表达明显上升,而在敲除DNMT3b 的TK6 恶性转化细胞中的表达无明显变化.并且,在敲除DNMT1的氢醌诱导TK6 恶性转化细胞中UCA1 的启动子甲基化水平明显下降.结论：在苯或氢醌致癌的过程中,NMT1 介导的UCA1 启动子DNA 低甲基化激活lncRNA UCA1 表达.
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