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目的:探讨Nupr1(Nuclear protein 1)通过内质网应激途径在甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)介导的神经细胞凋亡和自噬中的作用。方法:选用健康、清洁级雄性SD大鼠、原代培养的大鼠神经元、大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)为研究对象,经METH处理后,构建体内、外METH中毒模型。采用q-PCR、Western Blot、Immunofluorescence检测Nupr1、内质网应激标志蛋白CHOP和TRIB3、凋亡标志蛋白Cleaved-caspase3和Cleaved-PARP、自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况。在细胞模型中,用siRNA沉默PC12中Nupr1及CHOP的表达,再用流式细胞术、TUNEL染色及Western Blot检测Nupr1和CHOP沉默前后METH诱导PC12细胞凋亡和自噬的改变;同时在动物模型上,利用立体定位注射法将含有针对Nupr1基因的shRNA片段的慢病毒注射到大鼠纹状体沉默Nupr1基因的表达,经METH处理后,Western Blot检测纹状体中Nupr1、CHOP及TRIB3的表达,以及凋亡和自噬标志蛋白的表达情况。结果:METH亚急性中毒的动物模型中,Western Blot和免疫荧光结果显示:与对照组比较,METH处理组大鼠纹状体、前额叶皮质、海马和中脑中Nupr1、CHOP和TRIB3表达均显著升高。大鼠立体定位注射慢病毒沉默Nupr1后,Western Blot结果显示:纹状体中CHOP和TRIB3蛋白的表达随着Nupr1表达降低而降低,METH诱导升高的凋亡标志蛋白的表达也被显著抑制。这一结果也在原代培养的大鼠神经元和PC12细胞中得到验证:不同浓度METH处理原代培养大鼠神经元后Nupr1、CHOP、TRIB3的表达均上升,呈剂量依赖趋势。同样不同浓度METH处理PC12细胞后Nupr1、CHOP和TRIB3在mRNA及蛋白水平的表达量均上升,凋亡和自噬标志蛋白表达上升,亦呈剂量依赖趋势。用siRNA分别敲低PC12细胞Nupr1、CHOP后,Western Blot结果显示:Nuprl沉默后能降低CHOP及TRIB3的表达;CHOP沉默后能降低TRIB3的表达,但不影响Nupr1的表达;而Nupr1或CHOP沉默后,均能减低METH诱导的凋亡和自噬标志蛋白的表达。流式细胞术及TUNEL结果表明:不同浓度METH处理PC12细胞后凋亡增加,Nupr1降低后,凋亡细胞数显著减低。结论:METH可引起神经细胞内质网应激,进而诱导细胞凋亡和自噬,Nupr1是内质网应激介导的凋亡和自噬中的关键分子,并通过Nupr1-CHOP-TRIB3信号通路启动细胞凋亡和自噬。