猪圆环病毒Ⅰ型ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

来源 :中国畜牧兽医学会养猪分会2006年学术年会暨第四次全国会员代表大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lovely_fox
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根据GenBank中猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1) ORF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV1 ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(939bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒命名为pMD-ORF1.测序分析表明,克隆的ORF1与澳大利亚分离株AY754015.1核苷酸序列同源性高达99.6%.与其他PCV1核苷酸序列同源性为99.6%~98.8%,推导的氨基酸序列同源性为99.4%~98.4%.将ORF1双酶切产物插入原核表达载体PET-41a,得到重组子命名为PET-ORF1.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明PCV1 ORF1在PET-41a中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为67.6 ku.
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