【摘 要】
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将编码O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白主要抗原位点第141位～160位及200位～213位氨基酸的三串联基因片段(141～160-200～213-141～160)与含有ATG起始密码子的VP1基因亚克隆人pcDNA3.1(+)真核表达质粒中，成功构建了pcDNA-F与pcDNA-VP1重组质粒。分别将这两种重组质粒DNA与佐剂一起进行乳化，制备成油乳剂DNA疫苗。用制备的油乳剂DNA疫苗免疫B
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642
【出 处】
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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会
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将编码O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白主要抗原位点第141位～160位及200位～213位氨基酸的三串联基因片段(141～160-200～213-141～160)与含有ATG起始密码子的VP1基因亚克隆人pcDNA3.1(+)真核表达质粒中，成功构建了pcDNA-F与pcDNA-VP1重组质粒。分别将这两种重组质粒DNA与佐剂一起进行乳化，制备成油乳剂DNA疫苗。用制备的油乳剂DNA疫苗免疫BALB/c小鼠，所有小鼠共进行3次免疫，每15天加强免疫一次，三免后15天断尾采血分离血清，检测抗体。另外,三免28后断颈处死小鼠，无菌采取其脾脏，制备脾淋巴细胞，做淋巴细胞增殖试验(MTT)和自然杀伤细胞活性试验。结果表明：pcDNA-F和pcDNA-VP1均能够刺激小鼠产生特异性抗体，ConA认能刺激免疫鼠的T淋巴细胞增殖，疫苗组小鼠的NK细胞的杀伤能力也明显高于阴性对照组。
其他文献
采用猪大肠杆菌C83549(O149：K88ac)、c83644(068：K99)、C83710(09：987P)菌株制备抗原，以蜂胶为佐剂，研制仔猪大肠杆菌病三价蜂胶灭活疫苗，疫苗成品各项检验均符合相关要求。将疫苗免疫妊娠母猪并用凝集试验测定其所产仔猪的抗体消长规律，并研究疫苗免疫保护情况。结果表明：妊娠母猪产前40天和15天各免疫1次所产仔猪母源抗体效价较高，仔猪在整个哺乳期都可以得到保护。同
从B型产气荚膜梭菌C58-2中扩增出了ε毒素完整成熟肽基因的片段，克隆到pGEM-T Easy载体后，选取阳性重组子，经PCR和双酶切鉴定后，提取质粒并双酶切，最终克隆到pET28a载体中，并转化到BL21(DE3)受体菌中，经PCR、双酶切和测序鉴定，表明目的片段已成功的克隆到pET28a中；用IPTG对重组菌进行了诱导表达，SDS-PAGE结果表明，诱导后的菌体蛋白中多了一条蛋白带，且与预期的
用独立水提法从高免鸡卵黄中提取IgY，主要受pH值和免卵黄稀释倍数的影响。实验证明水提法适宜条件是：首次，将原始高免卵黄用10倍的蒸馏水做溶剂，pH值在6.00，静置孵化温度4℃、时间48小时，吸出上清中IgY提取率为75％；再次，将沉淀卵黄用8倍的蒸馏水做溶剂，pH值在6.00，静置孵化温度4℃、时间24小时，吸出上清中IgY提取率13％，合计IgY提取率可达到88％。
用鸡传染性法氏囊病活疫苗((K85株，下称IBD疫苗)对5个不同品种、不同母源抗体水平的小鸡进行免疫效果试验，1羽份一次免疫10日龄小鸡，不同试验组产生免疫反应有差别，对超强毒攻击的保护率平均为83.6％；分别用1羽份在10日龄、20日龄二次免疫小鸡，均可产生良好的免疫反应和对超强毒攻击的100％保护；用1羽份一次免疫20日龄低或无母源抗体的小鸡，均可产生良好的免疫反应和对超强毒攻击的100％保护
在实验室里试制了七批鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗样品，经物理性状、无菌检验、甲醛和硫柳汞含量测定、安全性检验和效力检验，各项指标均合格。
将40日龄非免疫鸡分为3组，每组20只。第一组试验鸡肌肉注射鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗0.5ml/只，进行ND抗体和IB抗体检测；第二组试验鸡在第一次疫苗免疫之后71d，进行第二次疫苗接种，并检测ND抗体；第三组试验鸡不注射疫苗作为试验对照组。ND抗体用HI方法检测，IB抗体用间接ELISA方法检测。结果表明，第一组试验鸡接种疫苗后在6d就可以产生ND抗体4Log2，30d达到最高
将PCV2-Cap蛋白重组腺病毒(rAd-Cap)连续传代至第40代，测定其病毒滴度和Cap蛋白的表达水平，并取F10、F25和F40代病毒液，用0.2％的甲醛37℃16h，加入适量的白油佐剂制成油佐剂灭活疫苗，免疫14日龄仔猪，2周后加强免疫一次，分别于首免后4、3、4、5周进行ELISA抗体检测。并于首免后35天进行免疫效力保护试验。结果为：①rAd-Cap连续传代至第40代TCID50相似，
利用RT-PCR技术扩增猪呼吸道冠状病毒(PRCV)AR310毒株的S基因片断，构建了重组腺病毒中间载体pDNR-1r-Sl和表达质粒pInt.AV1.SpaT-S1。采用Cre-L0oxP同源重组腺病毒系统和共转染技术构建了携带PRCV S基因片断的复制缺陷型重组腺病毒，经目的基因PCR检测和序列测定，结果表明：PRCV S基因片断已正确地插入到腺病毒基因组中；Western-blotting和
利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区，其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下，大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因Lac
将番鸭呼肠孤病毒弱毒(MDRV-CA)与番鸭细小病毒弱毒(MPV-P1)按适当比例混合，试制了MDRV-MPV二联弱毒细胞苗，并测定了二联苗各项免疫指标。结果显示：试制出的疫苗对一日龄雏番鸭具有良好的安全性和遗传稳定性；一日龄雏番鸭免疫后7天能有效抵抗MDRV强毒的攻击；同时血清中MPV-LPAI效价均大于21，21-28天抗体达高峰，有效免疫期超过60天；疫苗-200 C保存期大于12个月。上述