【摘 要】
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目的 揭示日本血吸虫重组Sj16蛋白免疫调节的主要功能结构域和可能的作用机制.方法 分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),利用流式细胞术观察rSj16作用对LPS诱导的BMDC表面分子MHC-Ⅱ,CD80,CD86和CD40表达的影响和IL-10,IL-12等细胞因子表达的影响,并观察rSj16负载的BMDC对naive T细胞功能的影响,从而确认rSj16是否具有负调DC的作用.同时为了
【机 构】
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中山大学中山医学院寄生虫学教研室 香港中文大学生物系
【出 处】
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中华医学会第六次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议
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目的 揭示日本血吸虫重组Sj16蛋白免疫调节的主要功能结构域和可能的作用机制.方法 分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),利用流式细胞术观察rSj16作用对LPS诱导的BMDC表面分子MHC-Ⅱ,CD80,CD86和CD40表达的影响和IL-10,IL-12等细胞因子表达的影响,并观察rSj16负载的BMDC对naive T细胞功能的影响,从而确认rSj16是否具有负调DC的作用.同时为了确定rSj16负调DC作用与IL-10关系,进一步利用抗IL-10抗体,抗IL-10 R抗体和IL-10(-/-)小鼠,利用FACS和ELISA观察rSj16对来自IL-10(-/-)小鼠BMDC和抗IL-10抗体,抗IL-10 R抗体中和的WT BMDC表面分子和细胞因子作用的影响.为了证明rSj16是如何通过IL-10负调BMDC的功能和寻找rSj16作用的关键结构域,对Sj16的结构域进行分析,利用生物信息学预测发现Sj16存在两段核定位序列,利用定点突变的方法对Sj16核定位序列中的碱性氨基酸进行突变,并利用分子生物生物学方法构建rSj16 5个突变体,同时利用NHS-荧光染料标记rSj16及rSj16突变体,eonfoeal显微镜观察其是否可以直接进入BMDC细胞核内,同时利用FACS和ELISA观察其对LPS诱导的BMDC功能和表型的影响,从而判断其是否为Sj16的关键结构域.结果 rSj16剂量依赖性的抑制LPS诱导的BMDC功能并促进其产生大量的IL-10.利用抗体中和试验和IL-10(-/-)小鼠证实rSj16抑制LPS诱导的BMDC的作用与IL-10直接相关并通过IL-10R信号通路发挥作用.序列分析提示Sj16存在两段核定位序列(NLS),其中N-端的NLS (NLS1)是真正的核定位序列,与rSj16进入细胞核内和发挥免疫负调DC功能直接相关.结论 rSj 16具有确切的免疫调节功能,主要通过上调抗原递呈细胞的IL-10的表达从而调节宿主的Th细胞应答.Sj16具有两段预测的核定位序列,其中NLS1是rSj 16上调树突状细胞高表达IL-10的关键序列.
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