【摘 要】
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目的:对初步鉴定的牛种布鲁氏菌分离株(B.abortus 343)进行全面的生物学特性检定,为深入研究布鲁氏菌病提供参考菌株.方法:将B.abortus 343划线培养及梯度稀释,使其形成单个菌落,观察菌落形态.挑取单个菌落进行革兰氏染色和柯氏染色,观察其染色特点;分别接种1.5X106 CFU到含硫瑾(1:25000)或含碱性复红(1:25000)的TSA平板上,观察其生长状态;将接种有B.ab
【机 构】
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中国兽医药品监察所,北京100081 山东农业大学动物科技学院,泰安 271018
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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目的:对初步鉴定的牛种布鲁氏菌分离株(B.abortus 343)进行全面的生物学特性检定,为深入研究布鲁氏菌病提供参考菌株.
方法:将B.abortus 343划线培养及梯度稀释,使其形成单个菌落,观察菌落形态.挑取单个菌落进行革兰氏染色和柯氏染色,观察其染色特点;分别接种1.5X106 CFU到含硫瑾(1:25000)或含碱性复红(1:25000)的TSA平板上,观察其生长状态;将接种有B.abortus 343的TSA平板分别置普通培养箱和C02培养箱37℃培养72h,观察其对C02的依赖性;通过醋酸铅试纸条测定B.abortus 343代谢过程中是否释放H2S等.通过平板凝集试验测定布鲁氏菌单相特异性血清(牛种布鲁氏菌单因子血清A、羊种布鲁氏菌单因子血清M和布鲁氏菌粗糙型血清R)与B.abortus 343 抗原的反应性,利用布鲁氏菌AMOS-PCR种属分型等方法对B.abortus 343进行了PCR种属特性鉴定;将B.abortus 343免疫小鼠,分别测定其抗血清与光滑型和粗糙型抗原的反应性.通过小鼠和豚鼠感染试验,全面评价该分离株的毒力.分别以1x105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠,测定B.abortus 343在小鼠体内存活时间;以1X109CFU感染Hartley豚鼠,2周后测定试验豚鼠每克脾脏含菌量;分别以IOOOOCFU只、1000 CFU/只、100 CFU/只、25 CFU/只四种不同剂量感染豚鼠,初步测定分离株对豚鼠的最小感染量(MID),在此基础上,进一步以40CFU/只、60 CFL/只和90 CFU/只测定MID.
结果:分离株B.abortus343为光滑型牛种布鲁氏菌,菌落逆光观察微带蓝绿色乳光;革兰氏染色为阴性,柯氏染色为红色,H2S试验阳性.该菌能在含硫瑾和碱性复红的培养基上生长,不依赖于C020B.abortus 343抗原能与A因子血清呈明显凝集反应,免疫小鼠后能产生特异性抗体.以1x10s CFU感染6周龄Balb/c小鼠,可在小鼠体内存活 29周;以1x109 CFU感染350-400g雌性豚鼠,14天后豚鼠每克脾脏含菌量介于2.4x105 _1.2x106之间;以1x10s CFU感染豚鼠1个月后,所有试验豚鼠均能产生特异性光滑型抗体,试管凝集效价介于320-1280之间;B.abortus 343对豚鼠的最小感染量约为40个CFU.
结论:本研究鉴定了一株中等毒力牛种布鲁氏菌(B.abortus 343),为深入研究布鲁氏菌病提供了参考菌株,丰富了我国布鲁氏菌菌种资源.
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