【摘 要】
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用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，对杂交瘤细胞及时筛选，阳性孔经4次有限稀释法克隆，成功获得1A8、1F2、2D2、2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210、100×28。经Western blot分析表明
【机 构】
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江苏省农科院兽医所 农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室，江苏 南京 210014；南京农业大学动物医学学院，江苏 南京 210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
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用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，对杂交瘤细胞及时筛选，阳性孔经4次有限稀释法克隆，成功获得1A8、1F2、2D2、2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210、100×28。经Western blot分析表明，4株单抗与硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白均具有特异性反应，并且通过4种基因分片段缺失表达蛋白，分析了4株单抗所识别抗原决定簇的差异性，发现3株单抗识别表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627bp～790bp之间，另外一株则集中在IMPDH基因片段的411bp～790bp之间。猪链球菌2型中IMPDH蛋白的单克隆抗体制备及相应表位分析为研究IMPDH蛋白的生物学活性及免疫学活性奠定了基础。
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猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原，含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2，分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)，其中Cap含有病毒主要抗原表位，是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-2是重要的细胞因子佐剂，能够增强疫苗的免疫效果。本研究利用PCR技术将PCV2 Cap蛋白基因和IL-2-Cap串联基因分别克隆入人5型腺病毒穿梭
根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针，通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化，建立了TaqMan荧光定量RT2PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL，且具有很好的特异性和重复性，而常规RT2PCR方法只能检测到1.53×103拷/μL。对37份现地病
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