【摘 要】
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猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原，含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2，分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)，其中Cap含有病毒主要抗原表位，是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-2是重要的细胞因子佐剂，能够增强疫苗的免疫效果。本研究利用PCR技术将PCV2 Cap蛋白基因和IL-2-Cap串联基因分别克隆入人5型腺病毒穿梭
【机 构】
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江苏省农业科学院 兽医研究所，江苏 南京 210014 南京农业大学，江苏 南京 210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
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猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原，含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2，分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)，其中Cap含有病毒主要抗原表位，是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-2是重要的细胞因子佐剂，能够增强疫苗的免疫效果。本研究利用PCR技术将PCV2 Cap蛋白基因和IL-2-Cap串联基因分别克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV)，与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞，经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-Cap和rAd-IL-2-Cap。测定其TCID50为1010.6/mL，1010.2/mL。利用RT-PCR、IFA、间接ELISA、Wester blot等方法以及IL-2ELISA试剂盒分别检测猪圆环病毒2型Cap蛋白和IL-2的体外表达情况，结果证明了两基因在腺病毒中获得了表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。
其他文献
为了进行新型MD疫苗的开发，开展了融合蛋白基因合成的工作。利用RT-PCR从鸡肝脏中，扩增出约2.4ku的鸡HSP108基因，测序比较发现该基因的序列与GenBank上发表的序列的同源性约为99％。在体外，将MDV gB CTL表位与鸡HSP108融合在一起，构建融合蛋白基因gBHSP108，将该融合蛋白基因克隆入原核表达载体pET-28a中，构建重组表达载体pET-gBHSP108，将该重组载体
本研究旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对机体IFN-α mRNA表达水平的影响，为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。采用real-time PCR对DPV弱毒株及强毒株接种雏鸭肝脏中的IFN-α mRNA表达水平及病毒荷载量进行动态定量检测，结果显示，弱毒株能引起IFN-α mRNA在肝脏中快速、持续高水平表达，与空白对照相比，在接种后3h上升4倍，9h达到峰值(18.5倍)，12h～1
采用2×5因子试验设计[新城疫免疫(ND)分为免疫组和未免疫组，铅染毒按饮水中的醋酸铅浓度分为0mg/kg、50mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg和2000mg/kg]，将90只14日龄鹌鹑随机等量分配到各个试验组中，实行自由饮水和采食，研究了铅中毒和新城疫免对鹌鹑血液甲状腺激素、生长激素和皮质醇含量的影响。结果表明，试验35d后，ND免疫和铅中毒都可提高血清透明质酸含量(P＜0.0
采用2×5因子试验设计[新城疫免疫(ND)分为免疫组和未免疫组，铅中毒按饮水中的醋酸铅浓度分为0mg/kg，50mg/kg，500mg/kg，1000mg/kg和2000mg/kg]，将90只14日龄鹌鹑随机分配到各个试验组中，实行自由饮水和采食，研究了铅中毒和新城疫免疫对黄羽鹌鹑血液学性状的影响。结果表明，ND免疫可降低白细胞的数量(P＜0.01)和血红蛋白含量(P＜0.05)，对红细胞数量、血
以鸡胚分离结合血清学鉴定，从近几年江苏省及河南省分离到来自鸡、鸽的6株新城疫病毒，病毒蚀斑纯化后，选取3个克隆利用RT-PCR技术扩增F基因重要功能区片段，在对PCR产物直接序列测定分析基础上，选取一致克隆株进行全长F基因克隆、序列测定分析。根据分离株序列与GenBank中NDV相关毒株序列比较分析结果，所分离的6个分离株归属为3个基因型：基因Ⅶd亚型(3株)；基因Ⅵ型(2株)；基因Ⅲ型(1株)。
将2005年～2006年分离自黑龙江省扎龙自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的14株新城疫病毒(NDV)，通过鸡胚成纤维细胞(CEF)克隆纯化后，每株病毒选择3～4个病毒克隆用于F基因部分核苷酸片段扩增、PCR产物序列测定，并进行进化分析。根据F基因47～420nt片段构建的分子进化树分析表明，可将其中13/14株野鸟NDV归于基因Ⅶd亚型，具有该型毒株典型的F蛋白裂解位点，属于我国目前流行的
根据CAV的基因序列，选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针，将该目的片段克隆到pMD18-T载体中，作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件，建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性达到10个拷贝/μL，与其他禽病病毒无交叉反应，批间与批内重复试验相关系数都小于5％，表明其敏感性高，特异性好，重复性佳。
采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到IFN-γ基因，将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中。将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ，体外转染CEF细胞，24h后经间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western-blot)检测，表达蛋白具有良好的免疫原性。然后利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水疱口炎病毒(VSV*GFP)在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活
为了获得新型双价“自杀性”DNA疫苗，将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果，在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原，给养猪业带来巨大的经济损失。本研究利用PCR及荧光定量PCR检测猪人工感染猪圆环病毒2型后的体外排毒及体内分布规律，结果表明,猪感染PCV2可以通过呼吸道和消化道进行排毒，而且病毒一直持续存在，表现为无规律排毒；PCV2病毒主要存在于病猪的淋巴结、肾脏、肺脏中,在肝脏和脾脏中少量存在。初步明确了PCV2对猪的侵袭机理，