【摘 要】
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本研究通过PCR扩增番红霉素A生物合成基因簇中Mbth家族的sfmF基因,将扩增产物克隆至pTLV1,测序鉴定后,亚克隆至表达载体pET28a,构建sfmF蛋白原核表达质粒。经 PCR鉴定质粒正
【机 构】
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西安交通大学生命科学与技术学院,陕西 西安,710049
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本研究通过PCR扩增番红霉素A生物合成基因簇中Mbth家族的sfmF基因,将扩增产物克隆至pTLV1,测序鉴定后,亚克隆至表达载体pET28a,构建sfmF蛋白原核表达质粒。经 PCR鉴定质粒正确后,将sfmF基因表达质粒转化宿主菌E. coli BL21(DE3)中,通过IPTG进行诱导表达并进行纯化。通过亲和层析纯化得到分子量为11kD,纯度大于90％的带有组氨酸标签的sfmF蛋白,采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达情况。Bradford法定量纯化后目标蛋白含量为7.55mg/mL,为进一步研究sfmF蛋白功能及其反应机理提供了必要的基础。
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