重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物学特性

来源 :第九届全国病毒学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxuhhe
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  猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性,构建了以PCV2基因组为骨架,在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株,命名为recPCV2/CL-V5.采用免疫过氧化物酶单层试验(PMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定. 结果表明: 在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL-V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致.鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个V5表位,采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别.recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.25TCID50/mL.拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株,为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台.
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