地表地芽孢杆菌短链脱氢酶的克隆表达及酶学性质分析

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  为了研究地表地芽孢杆菌中短链脱氢酶的催化特性,从地表地芽孢杆菌Geobacillus subterraneus基因组DNA克隆表达了一个短链脱氢酶的编码基因gsd,并分析了该基因产物的酶学性质.基因gsd全长555 bp,编码184个氨基酸.重组GSD分子大小为24 kDa,具有嗜热酶的催化特征,底物谱较广.以丙酮酸乙酯为最适氧化底物,Km值为20.25 mmol/L,Vmax为238.10 U/mg,最适反应温度和pH分别为65℃和10.5;还原乳酸乙酯时,最适温度和pH为65℃和7.5.重组GSD既能耐受浓度高达70% (V/V)的甲醇溶剂,又能同时利用NAD(H)和NADP (H),可用于构建辅酶再生体系.除此之外,重组GSD热稳定性强,低浓度的金属离子和EDTA对其酶活的影响不大.上述结果表明,重组GSD是一个新型的α-酮酸还原酶,可应用于α酮酸的不对称还原生成光学纯的α-羟基酸.
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