【摘 要】
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本研究以接种黑胫病病原菌Leptosphaeria biglobosa(NM-1)7d后油菜叶片总RNA反转录的cDNA为模板,根据GenBank中pgip9、pgip 15C DS序列设计引物,并去掉信号肽序列,克隆到
【机 构】
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内蒙古农牧业科学院植物保护研究所,呼和浩特010031
【出 处】
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中国植物病理学会2015年学术年会
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本研究以接种黑胫病病原菌Leptosphaeria biglobosa(NM-1)7d后油菜叶片总RNA反转录的cDNA为模板,根据GenBank中pgip9、pgip 15C DS序列设计引物,并去掉信号肽序列,克隆到了pgip9、pgip15除信号肽以外的编码区片段.并对PGIP9、PGIP15的重复LRR结构域进行预测,PGIP9第125～172个氨基酸富含LRR,PGIP15第72 ～269个氨基酸富含LRR,都保证了与PG相互识别的结构域.随后将其克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA中构建分泌型重组酵母表达菌株,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测,均在36～37KDa处出现单一的蛋白条带,得到高效表达的PGIP蛋白,说明PGIP蛋白分泌表达成功.DNS法和琼脂糖扩散法证明PGIP9和PGIP15蛋白对Leptosphaeria biglobosa PG有抑制作用.本研究为PGIP蛋白的体外表达提供了有效的技术基础,并为PGIP蛋白对黑胫病病原菌及其他真菌分泌PG的互作机理及对油菜抗黑胫病的研究提供理论依据.
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