论文部分内容阅读
目的探讨骨架相关信号通路在微囊藻毒素LR（MC-LR）毒性机制中的作用。方法人肝细胞来源的HL7702细胞用MC-LR 0,0.001,0.01,0.1,1和10μmok·L-1。MTT法检测MC-LR对HL7702细胞存活;免疫荧光法观察细胞骨架;流式细胞术检测细胞周期;AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡;实时荧光定量法检测mRNA水平;Western blotting法检测蛋白表达和磷酸化水平。结果不同浓度MC-LR处理24 h后,细胞增殖随着染毒浓度的增高而逐渐降低。MC-LR暴露导致微丝和中间纤维结构发生改变,而微管无明显变化。随着染毒浓度增加,Go/G1期细胞逐渐增加,S期细胞逐渐减少。随着染毒浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升。MC-LR对骨架相关基因的转录水平均无明显影响。MC-LR暴露后,除K8的蛋白水平下降外,其他骨架相关蛋白表达均无明显改变。MC-LR可使K8/18,Vimentin和VASP的磷酸化水平显著升高。MAPK信号通路中P38、ERK1/2和JNK的蛋白表达无明显改变,但磷酸化水平显著升高。P38和ERK1/2抑制剂能显著抑制MC-LR诱导的微丝和中间纤维相关蛋白过磷酸化,而JNK抑制剂无显著效果。结论 MC-LR的肝细胞毒性可能是通过MAPK信号通路（P38和ERK1/2）的激活,引起骨架相关蛋白的过磷酸化,进而发生微丝和中间纤维的重排、破坏,并最终导致细胞增殖抑制、细胞周期阻滞和细胞凋亡。