【摘 要】
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目的 对酮酸显色法检测DAO酶活性的条件进行改进,以建立适合筛选大鼠脊髓DAO抑制剂治疗疼痛的方法。方法 大鼠脊髓粗提液与底物D型丙氨酸反应后加三氯乙酸终止反应,上清液先与酸化的2,4-二硝基苯肼反应,再碱化显色后于450 nm测定吸光度值以计算脊髓D型氨基酸氧化酶(DAO)酶活力。为确定最佳条件,酶粗提液首先与过量底物反应,选取反应未饱和但显色明显的时间点作为合适反应时间；之后测定在此时间内脊髓
【机 构】
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上海交通大学药学院King's实验室,上海200240
【出 处】
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第十四届中国神经精神药理学学术会议
论文部分内容阅读
目的 对酮酸显色法检测DAO酶活性的条件进行改进,以建立适合筛选大鼠脊髓DAO抑制剂治疗疼痛的方法。方法 大鼠脊髓粗提液与底物D型丙氨酸反应后加三氯乙酸终止反应,上清液先与酸化的2,4-二硝基苯肼反应,再碱化显色后于450 nm测定吸光度值以计算脊髓D型氨基酸氧化酶(DAO)酶活力。为确定最佳条件,酶粗提液首先与过量底物反应,选取反应未饱和但显色明显的时间点作为合适反应时间；之后测定在此时间内脊髓粗提液与不同浓度底物的反应速率,以此用双倒数图推算Km值；最后,在Km值底物浓度和合适反应时间的条件下,测定DAO抑制剂CBIO,化合物8,苯甲酸钠和NPCA离体活性,以及CBIO(10mg· kg-1)sc给药对脊髓DAO在体活性和疼痛的影响。
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