【摘 要】
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目的 体外培养人真皮成纤维细胞,用无机砷及其代谢物进行染毒,观察染毒后细胞增殖、周期及凋亡,并检测DNA修复相关的XPA,XPC,PARP1和ERCC3基因的表达变化,探讨砷及其代谢物导致细胞皮肤损伤的分子机制.方法 取8例6～10岁健康儿童志愿者包皮组织进行原代培养、分离人真皮成纤维细胞.传代培养至第10代后,分别以无机砷化合物亚砷酸钠(Na2AsO2)、二甲基胂酸(DMAv)、单甲基胂酸(MM
【机 构】
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新疆医科大学公共卫生学院,新疆乌鲁木齐市830011
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目的 体外培养人真皮成纤维细胞,用无机砷及其代谢物进行染毒,观察染毒后细胞增殖、周期及凋亡,并检测DNA修复相关的XPA,XPC,PARP1和ERCC3基因的表达变化,探讨砷及其代谢物导致细胞皮肤损伤的分子机制.方法 取8例6～10岁健康儿童志愿者包皮组织进行原代培养、分离人真皮成纤维细胞.传代培养至第10代后,分别以无机砷化合物亚砷酸钠(Na2AsO2)、二甲基胂酸(DMAv)、单甲基胂酸(MMAⅢ)进行染毒,混匀分为4组,即高、中、低、对照组.在72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,检测不同浓度的iAsⅢ,DMAv和M MAⅢ(0,5,10,15和25 μ mol·L-1)对人真皮成纤维细胞体外增殖的变化.流式细胞仪(Flow cytometer)检测不同浓度的iAsⅢ,DMAv和M MAⅢ(0,5,15和25μmol·L-1)刺激人真皮成纤维细胞的凋亡和周期变化状况.通过实时荧光定量(PCR)检测不同浓度的iAsⅢ,DMAv和MMAⅢ(0,5,15和25 μmol·L-1)刺激人真皮成纤维细胞后,修复基因XPA,XPC,PARP1和ERCC3的表达水平.结果 人真皮成纤维细胞通过MTT比色法检测得出结果：和对照组对比,人真皮成纤维细胞经不同浓度的iAsⅢ,DMAv,MMAⅢ刺激后,吸光度值发生变化,存在剂量-反应关系(P＜0.05)；用0,5,15和25 μmol· L-1的iAsⅢ,DMAv,MMAⅢ的浓度作用人真皮成纤维细胞,G0/G1期细胞比例明显下降(P＜0.05),G2/M期和S期细胞比例较对照组明显增加(P＜0.05)；高、中剂量iAsⅢ,DMAv,MMAⅢ处理组细胞G1期细胞所占百分数增多,提示细胞在G1期出现阻滞的趋势,G2和S期细胞所占百分数较少.XPA,XPC,PARP1,ERCC3在iAsⅢ,DMAv,M MAⅢ药物作用下,mRNA在0～10 μ mol·L-1浓度的表达量出现上升趋势,而随着iAsⅢ,DMAv,M MAⅢ药物作用浓度的增加,在15 ～ 25μmol· L-1浓度的mRNA表达量显示有下降趋势,有统计学意义(P＜0.05).结论 在细胞增殖试验中,不同浓度的iAsⅢ,DMAⅤ,MMAⅢ诱导人真皮成纤维细胞后,吸光度产生了明显的变化,0～10 μmol·L-1浓度的iAsⅢ,DMAⅤ,MMAⅢ对人真皮成纤维细胞有促进细胞增殖作用,而15 ～25 μmol·L-1浓度的iAsⅢ,DMAⅤ,MMAⅢ对人真皮成纤维细胞有抑制细胞增殖作用.0 ～10 μmol·L-1浓度的iAsⅢ,DMAⅤ,MMAⅢ对人真皮成纤维细胞促进XPA,XPC,PARP1和ERCC3基因的表达,15～25 μmol·L-1浓度的iAsⅢ,DMAⅤ,M MAⅢ对人真皮成纤维细胞抑制XPA,XPC,PARP1和ERCC3基因的表达.
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