【摘 要】
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目的：通过对人T淋巴细胞中转录因子GATA3进行基因沉默,建立GATA3+/-、GATA3-/-基因型T细胞体外培养的模型.在此模型基础上,观察GATA3基因沉默后对T细胞体外增殖和凋亡的影响.研究加入不同浓度的RARs选择性激动剂TTNPB,RXRs选择性激动剂MA,RARs选择性抑动剂BIBn和RXRs选择性抑动剂HX603对新生儿脐血T细胞分泌IFN-γ和IL-4的影响,从而进一步探讨转录因
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室
【出 处】
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四川省营养学会2012年学术年会暨妇幼营养专题研讨会
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目的：通过对人T淋巴细胞中转录因子GATA3进行基因沉默,建立GATA3+/-、GATA3-/-基因型T细胞体外培养的模型.在此模型基础上,观察GATA3基因沉默后对T细胞体外增殖和凋亡的影响.研究加入不同浓度的RARs选择性激动剂TTNPB,RXRs选择性激动剂MA,RARs选择性抑动剂BIBn和RXRs选择性抑动剂HX603对新生儿脐血T细胞分泌IFN-γ和IL-4的影响,从而进一步探讨转录因子途径和受体途径的双因素联合作用下对Th1/Th2亚群分化的影响.方法：将化学合成的GATA3靶向小干扰RNA片段瞬时转染至T细胞,通过流式细胞术检测转染效率,实时荧光定量RT-PCR方法检测沉默效率,建立GATA3+/-、GATA3-/-基因型T细胞体外培养的模型.在此模型基础上,通过MTT法和流式细胞术,观察沉默后对T细胞体外增殖和凋亡的影响,并用不同浓度的TTNPB、MA、BIBn和HX603(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)进行干预,通过ELISA和实时荧光定量RT-PCR方法分别从蛋白水平和mRNA水平检测IFN-γ和IL-4的分泌水平.结果：(1)运用RNA干扰成功建立GATA3+/-、GATA3-/-基因型T细胞体外培养模型；(2) GATA3沉默24h后,与对照组相比刺激指数(SI)显著增高(P＜0.05),与沉默后48h和72h相比SI显著增高(P＜0.05)；(3) GATA3沉默48h后,与对照组相比T细胞晚期凋亡显著减少(P＜0.05)；(4) IFN-γ、IL-4结果：ELISA结果主要有：正常组中,10-7、10-6、10-5、10-4mol/L的MA中IFN-γ的蛋白含量及IFN-γ/IL-4的值均显著低于空白组(P＜0.05).实时荧光定量RT-PCR结果主要有：正常组中,10-7、10-6、10-5、10-4mol/L的TTNPB组中IFN-γ mRNA表达水平均显著低于空白组(P＜0.05)； 10-7、10-6、10-5、10-4mol/L的TTNPB,10-7、10-6、10-4mol/L的MA组中IFN-γ/ IL-4的值均显著低于空白组(P＜0.05).沉默组中,10-5、10-4mol/L的TTNPB,10-6、10-5mol/L的MA,10-7 mol/L的HX603组中IFN-γ的mRNAB表达水平均显著高于空白组与对照组(P＜0.05)；10-6、10-5、10-4mol/L的HX603组中IL-4的mRNA表达水平均显著低于空白组与对照组(P＜0.05)；10-7、10-5、10-4mol/L的TTNPB, 10-6、10-4mol/L的MA, 10-7、10-6、10-5mol/L的BIBn, 10-7、10-6、10-5、10-4mol/L的HX603组中IFN-γ/IL-4的值均显著高于空白组与对照组(P＜0.05).结论：(1)成功建立GATA3+/-、GATA3-/-基因型T细胞体外培养模型；(2) GATA3沉默后24h可能为加入相应受试物的最佳时点；(3) GATA3沉默后48h,细胞晚期凋亡被抑制,对早期凋亡无影响；(4)在一定浓度范围内,TTBPB与MA可以抑制Th1促进Th2分化；BIBn和HX603对T细胞效果不明显；(5) GATA3沉默后抑制Th2促进Th1分化.在一定浓度范围,GATA3沉默后抑制Th2促进Th1分化的作用大于TTNPB和MA抑制Th1促进Th2分化的作用.
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