【摘 要】
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柞蚕是一种重要的野生绢丝昆虫,除可作为纺织工业原料利用外,亦具很高的药用和食用等经济价值.本文采用抑制消减杂交的方法构建大肠杆菌刺激的柞蚕蛹cDNA文库,经测序,共获得了328个有效的EST序列,通过NCBI上Blastn的在线比对和CAP3软件进行的序列拼接分析,最终共得到202个可注释的unigenes,根据其功能可分为以下九组:免疫应答相关基因(50个),细胞骨架相关基因(3个),细胞生殖与
【机 构】
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安徽农业大学 安徽合肥23003 河南省经济作物推广站 河南郑州450008
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柞蚕是一种重要的野生绢丝昆虫,除可作为纺织工业原料利用外,亦具很高的药用和食用等经济价值.本文采用抑制消减杂交的方法构建大肠杆菌刺激的柞蚕蛹cDNA文库,经测序,共获得了328个有效的EST序列,通过NCBI上Blastn的在线比对和CAP3软件进行的序列拼接分析,最终共得到202个可注释的unigenes,根据其功能可分为以下九组:免疫应答相关基因(50个),细胞骨架相关基因(3个),细胞生殖与凋亡相关基因(8个),能量代谢相关基因(5个),转运相关基因(5个),物质代谢相关基因(40个),胁迫应答相关基因(10个),转录与翻译调控相关基因(4个)以及未知蛋白(77个).随后,搜集大肠杆菌刺激柞蚕蛹不同时间的脂肪体组织,利用半定量PCR和定量PCR技术,挑选若干免疫相关基因进行了功能验证.结果表明,对于模式识别受体,肽聚糖识别蛋白和β-1,3-葡聚糖识别蛋白在0.5小时大量表达,肽聚糖识别蛋白A在3小时上调超过80倍,类免疫球蛋白也在三小时上调超过三倍,而凝集素A和球蛋白在外源物刺激前也有一定量的表达.对于抗菌肽,其中attacin-1在三小时达到最大表达量,溶菌酶在12小时表达量最大,lebocin2蛋白在24小时诱导表达达到顶峰.此外,微卵黄原蛋白、多巴脱羧酶和谷胱甘肽转移酶theta在0.5小时诱导表达量超过两倍,蛋白酶抑制剂5、6、8在三小时处表达明显增加,蛋白酶抑制剂3,丝氨酸蛋白酶1和蛋白酶抑制剂4在24小时明显上调,这与先前的实验结论相吻合.该研究将为进一步探明柞蚕先天免疫机制以及利用生物技术提高柞蚕的抗病性提供参考.
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