第一部分 组织工程心脏瓣膜支架的制备 1 不同组织工程瓣膜制作方法的比较 目的 探讨去垢剂和胰蛋白酶对于猪主动脉瓣膜去细胞过程的影响,研究组织工程心脏瓣膜生物支架的最佳制备方法。 方法 将猪新鲜主动脉瓣膜分为3组,组1用1.5mol/L氯化钠震荡12小时和0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液处理30分钟,组2用0.25%的曲拉通X100、0.25%的脱氧胆酸钠、0.02%的EDTA、RNase I 200mg╱L和DNase I 20mg╱L溶液,恒温37℃持续震荡48小时,组3用0.05%的胰蛋白酶、0.02%的EDTA溶液,恒温37℃持续震荡24小时以及PBS持续震荡清洗24小时等处理,去除内皮细胞和间质细胞,常规苏木精伊红和Masson染色,光镜和电子扫描显微镜检查,评价去细胞效果。DAPI细胞核染色,免疫荧光显微镜观察,评价细胞核去除效果。 结果 NaCl-SDS对瓣膜超微结构损伤小,外观改变不明显,但去细胞不彻底,HE切片仍然见大量细胞核;胰蛋白酶法去细胞彻底,对结构损害大,胶原纤维可见明显断裂,曲拉通脱氧胆酸钠法未见细胞核,能有效去除细胞成分,对瓣膜结构损伤较小,扫描电镜可见基底膜。DAPI细胞核染色发现NaCl-SDS法大量DNA残留,胰蛋白酶法和曲拉通脱氧胆酸钠法未见DNA。 结论 曲拉通脱氧胆酸钠法可以有效去除细胞成分,对瓣膜结构影响较小,是一种有效去细胞的方法。 2 组织工程心脏瓣膜支架制作方法的改进及其生物学特性 目的 研究去细胞组织工程心脏瓣膜支架制作方法的改进及其生物学特性。 方法 以胰蛋白酶处理瓣膜30分钟后,再以曲拉通脱氧胆酸钠核酸酶处理48小时,进行扫描电镜和组织学检查。测定瓣膜去细胞前后的含水量,细胞的可溶性蛋白含量,以岛津力学检测仪检测瓣膜的力学特性,瓣膜浸润提取液对细胞生长的影响。将去细胞瓣叶植入新西兰种大白兔皮下,2、4、8、12周取材以检测瓣叶的组织相容性,以商用生物瓣膜为对照组。