猪三个RNASE和D6及其部分配体基因的克隆、SNP检测及性状关联分析

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第一部分猪RNase A超家族三个基因的克隆、SNP检测及其与血液参数的关联分析单纯追求生产性能的提高通常会导致猪对疾病抵抗力的降低,而几乎所有的疾病都与遗传相关,故从遗传本质上提高猪对疾病抵抗力具有治本的功效。迄今为止,猪分子抗病育种已取得了一定的进展,但还不够深入且已识别的抗病相关基因的数目极为有限。核糖核酸酶A(Ribonclease A,RNase A)超家族13个成员都具有一个催化三联体结构,可催化降解RNA。研究发现该超家族的某些成员还具有杀菌、抗微生物、抗病毒和促血管生成的能力,可做为猪抗病育种的候选基因。本研究采用生物信息学、群体遗传学和分子生物学等方法,对猪RNASE1、ANG和RNASE6基因进行了深入的研究,取得了如下结果:(1)利用猪EST数据库的信息,分离得到了猪RNase A超家族中RNASE1、ANG和RNASE6三个基因部分cDNA序列,并获得GenBank收录号为:EU814500~EU814502;进行了蛋白质序列的推导、不同物种同源基因序列比对和系统进化树分析。(2)SNP检测发现如下3个多态性位点:RNASE1基因g.296A>G位点;ANG基因g.149G>T位点;RNASE6基因g.389C>T位点。(3)采用PCR-RFLP方法在七个不同品种的猪群体中检测了RNASE6基因的g.389C>T多态位点,并计算了基因型和基因频率。(4)在广东温氏畜牧股份有限公司水台原种猪场的长白猪群中,对猪ANG和RNASE6基因多态位点与血液参数进行了初步关联分析。初步分析发现ANG基因的g.149G>T位点与0日龄平均红细胞体积、平均血红蛋白含量、血小板平均体积、大血小板比率和32日龄平均红细胞体积存在显著相关(P<0.05);RNASE6基因的g.389C>T位点与0日龄平均红细胞体积、平均血红蛋白含量和中性粒细胞百分比存在显著相关(P<0.05)。第二部分猪D6及其部分配体基因的克隆、表达初探及SNP筛查受多因素影响的产仔数性状,采用常规育种技术难以对该性状进行有效的遗传改良。故采用分子育种方法对母猪产仔数进行改良,可能会促进养猪业再次快速发展。妊娠时,胚胎(胎儿)及其附属物不被母体所排斥,母胎免疫耐受在其中起了非常重要的作用,从而使胎儿能够在母体内发育直至成功分娩。趋化因子及其受体在母胎免疫耐受中起了很重要的作用。趋化因子诱饵受体D6[即趋化因子结合蛋白2(Chemokine-binding Protein 2,CCBP2)]不仅可以结合几乎所有具有生物活性的炎性CC族趋化因子(CCL2-5、7、8、11-14、17和22),而且能防止因白细胞过多的浸润而造成的流产。基于此,本研究采用生物信息学和分子生物学等方法,对猪D6及其部分配体基因进行了初步的研究,取得了如下结果:(1)利用猪HTGS和EST数据库的信息,分离了猪D6、CCL8、CCL11、CCL14、CCL17和CCL22六个基因部分cDNA序列,并获得GenBank收录号为:FJ156751~FJ156756;进行了蛋白质序列的推导、不同物种同源基因序列比对以及猪D6基因的电子定位。(2)采用半定量RT-PCR的方法分析了上述基因在妊娠65天的通城猪正常与异常妊娠附植位点子宫内膜、非附植位点子宫内膜、尿囊绒毛膜和正常妊娠羊膜共7个组织中的表达情况。(3)SNP筛查发现猪CCL8基因可能存在5个突变位点,猪CCL11基因可能存在4个突变位点。
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