VEGF165基因转染预防移植静脉再狭窄

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目的:探讨腺病毒介导VEGF165基因转染对自体移植静脉术后再狭窄的预防作用。 方法:通过细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因重组腺病毒,转染体外培养的人脐静脉内皮细胞,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、酶联免疫吸附试验(ELISA)、噻唑蓝(MTT)比色法检测内皮细胞VEGF165基因表达和细胞生长情况;进而,建立猪颈静脉移植模型,术中采用体外孵育方法将VEGF165基因转染至移植静脉,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、病理组织学检查观察VEGF165基因在移植静脉中的表达情况及其对移植静脉内皮细胞修复和内膜增生的影响。 结果:本研究通过脂质体介导细胞内基因重组技术成功构建pDC315-VEGF165腺病毒,在HEK293细胞(转化腺病毒E1基因的人胚肾细胞系)中大量扩增、纯化后得到滴度为1.6×1012pfu/ml(每博士学位论文VEGF165基因转染预防移植静脉再狭窄毫升空斑形成单位,Plaque forming unit/ml),纯度为1.48的腺病毒液;通过腺病毒介导将VEGF,6。基因转染至体外培养的ECV304人脐静脉内皮细胞中RT一PCR检测表明内皮细胞VEGF165mRNA表达随MOI(感染复数,Multiplieity of infeetion)增加而增加,免疫组化检测显示转染组内皮细胞呈阳性表达,细胞生长明显加快,细胞倍增时间缩短为3.5天;在猪颈静脉移植模型中,转基因组术后VEGF,6。mRNA及VEGF16。蛋白表达明显增加,并维持至术后4周,移植静脉内皮细胞修复加快,较早完成内皮化血管平滑肌细胞增殖减少,内膜增厚明显减轻,最厚时为正常静脉的1.54倍,而对照组内膜增厚达正常静脉的2.23倍,两组比较有显著性差异(P=0.001)。结论:腺病毒介导VEGF165基因转染促进自体移植静脉内皮细胞修复,抑制内膜增生,减轻术后再狭窄。
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