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遗传性牙本质发育不全(dentinogenesis imperfecta DGI)是一种常染色体显性遗传病，发病率为1／8000，临床上将其分为三型，Ⅰ型，DGI—Ⅰ，又名牙本质生成不全，患者除牙本质生成不全外，常伴有成骨发育不全的症状，其病因为广泛的Ⅰ型胶原基因突变。Ⅱ型，DGI—Ⅱ，又名遗传性乳光牙本质(hereditary opalescent dentin)，外显率近100％，其病因与牙本质的矿化不良有关。Ⅲ型，DGI—Ⅲ，又名白兰地型牙本质生成不全(dentinogenesis imperfecta，Brandywine type)或称为隔离群遗传性乳光牙本质(isolate hereditary opalescent dentin)，为孤立发生于美国马里兰州华盛顿DC的3个隔离民族群中特殊的遗传性乳光牙本质，该病由Witkop 1956年最初报道，国内未见报道。 2001年我国学者成功克隆了DGI—Ⅱ的致病基因-DSP基因。在上海中国科学院孔祥银研究组收集的6个DGI-Ⅱ家系中有3个在DSP基因找到了突变，但来自岳阳、宁南、大连的3个家系在DSP基因并未找到与表型相符的突变。因此我们对这三个家系分别选取了4q21区域的高杂合度STRP微卫星标记进行连锁分析，以了解DGI-Ⅱ在我国患者中的基因定位情况。同时还对4q21区域的候选基因进行了PCR和DNA测序，为进一步寻找致病基因奠定基础。 第四牟医人学博十学位论文1遗传性牙本质发育不全＊型三例家系致病基因的连锁分析 我们对大连家系选取4qZI区域的4个高杂合度STRP微卫星标记、岳阳家系选取6个高杂合度STRP微卫星标记、四川宁南县家系选取6个高杂合度STRP微卫星标记进行连锁分析。 结果显示岳阳家系在位点D4S451、D452622、DMPI、D451563值均大于1，提示支持连锁。而在位点DSPP，Lod （，因此我们进行了多点连锁分析，提示该区域与 DG的致病基因相连锁。单体型分析结果显示该家系致病基因在D45451、D452622、DMPI、D4S1563多态位点均发生了交换。尤其是第4代39号个体，第5代19号个体在DSPP发生交换，这与 2001年报道的 DGlll致病基因定位 DSP基因不相符，推测DGI．11可能具有异质性，但仅为推测。进一步的证实还需遗传距离更小的的高度多态STRP微卫星标记进行深入分析。 宁南家系两点连锁分析结果显示在位点DSPP、DMPI、SPPI、D4S1563值均大于1，提示支持连锁。其多点分析结果显示Lod最大值在位点 DSPP与 DMP位点之间。单体型分析结果显示在 D45451、D452690、DMPI、SPPI、D4S1563多态位点均发生了交换。因此DG 11致病基因范围被界定在D452690与DMPI位点之间。与国外报道相似。 在大连的家系两点连锁分析结果表明在位点D45451、DSPP、SPPI和 D4S1563，0值由 0至0．4变化时LOd值均为负值，无法运用 SllALKZVersionZ．31和CYRILLIC 2．02软件在该区域构建有序的单体型图，提示该家系可能与4qZI区域不连锁。但山于该家系样本信息含量较小，因此还需要积累更多的家系资料并做进一步连锁分析。 DG致病基因的定位是定位克隆的首要步骤。接下来还需对岳阳家系和宁南家系连锁区的位置性和功能性基因进行筛选。以期最终揭示这两个家系的致病基因。 4 第四军医人学助＿1：学位论文2候选基因筛选 在第一部分实验确定的连锁范围内按遗传距离依次排列着一簇与骨－牙矿化发育密切相关的多个功能性兼位置性候选基因，依次为：BMP3（Bone morphogenetlc protein 3），DSPP（Denm slalo phosphoproteln），DMPI（Denim matrix protein），BSP（Bone slaloprotein 11），SPPI（0幻刚p＊ndn，＊＊N）等：另外还有多个位置性候选基因：如NUD Tg（nucleoside dlphosphate 11伙ed moiety X－twe motifg），KLHLS（belch－like8），LOC2207693（similar to heat shock protein 90－beta）等。 为寻找岳阳、宁南家系的DGI－11致病基因，避兔漏检，本研究对以上候选基因均进行了DNA测序检测，选取DSPP启动于及DPP基因、MEPE和BSP基因进行报道。 DSPP基因启动子、DPP基因编码区及其临近内含子序列分段PCR和DNA测序检测结果显示：DPP基因编码区、DSPP基因启动子内未找到任何基因变化。同时课题组的其它人员对DSP基因也进行了分段测序，结果也未发现符合表型的基因突变。这与2001年我国学者报道的DGIJ的致病基因－DSP不相符。提示DGI－11的致病基因可能具有遗传异质性。但在DSPP基因其他区域是否含有符合表型的基因突变，还有待于进一步的研究。 MEPE和BSP基因的编码区及其临近内含子序列分段PCR和DNA测序检测结果显示：在MEPE基因发现C．1027G＞A的碱基变化，此变化导致MEPE出现V3301的氨基酸变化；在BSP基因发现C．797G＞A的碱基变化，该变化导致BSP出现GZ19R的氨基酸变化。但这两种变化在家系内与表型不存在—一对应关系。山此排除了MEPE、BSP为两个DGI川型家系致病基因的可能。