【摘 要】
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本研究以微流控芯片为技术平台,构建了乳腺癌组织阵列并将之用于抗肿瘤药物敏感性测试。研究内容包括: 一、微流控芯片上的乳腺癌组织微阵列构建 目的:发展一种基于微流控
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本研究以微流控芯片为技术平台,构建了乳腺癌组织阵列并将之用于抗肿瘤药物敏感性测试。研究内容包括: 一、微流控芯片上的乳腺癌组织微阵列构建 目的:发展一种基于微流控芯片的乳腺癌组织微阵列构建方法。 方法:制作一种包含多孔聚碳酸酯薄膜的多层复合式微流控芯片,集成细胞进样、水凝胶支架形成以及连续灌流培养等功能。将含有乳腺癌MCF-7细胞的海藻酸钠溶液灌入芯片,继而引入钙离子聚合海藻酸钠构建3D培养支架。在灌注培养的15天内,连续监测细胞的生存、增殖、代谢情况,并通过组织切片和免疫荧光染色观测细胞形态结构。 结果:芯片上连续培养15天内细胞存活率保持在85%以上,细胞增殖率随时间延长而递减。乳腺癌细胞在水凝胶微球中持续增殖形成了类组织结构。E-cadherin及Vinculin在细胞内、细胞间隙均出现较强表达,提示细胞-细胞以及细胞-间质连接的建立。细胞内pH检测显示芯片培养细胞内部呈现明显的酸化,其程度随着细胞密度增大而增加。 结论:所发展的芯片乳腺癌组织微阵列构建方法操作简单且仿真性强,有望发展成为肿瘤研究的有力工具。 二、微流控芯片乳腺癌组织微阵列用于抗肿瘤药物测试 目的:发展一种基于微流控乳腺癌组织微阵列的高通量抗肿瘤药物测试方法。 方法:对第一部分工作中所使用的芯片结构加以改进。利用微流控芯片完成细胞接种、水凝胶支架形成、连续灌注培养以及梯度浓度药物刺激。实验将MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞悬液分别接种于芯片,持续灌流培养3天后施加阿霉素梯度浓度刺激24小时,之后检测细胞存活率。 结果:不同培养方式下,乳腺癌细胞存活率均随盐酸阿霉素浓度的增加而降低。在2D培养方式下,细胞存活率与药物浓度呈现出剂量-效应相关性,这种效应对于MCF-7细胞更为明显。在静态3D和芯片动态3D培养方式下,乳腺癌细胞的药物敏感性均显著降低。 结论:芯片实现了乳腺癌体内微环境的细致仿真。芯片药物测试较之传统方法更为简便,测试结果也更加接近体内情况。这种基于微流控芯片的抗肿瘤药物测试方法有望成为肿瘤个体化治疗方案的制定提供重要的参考信息。
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