玉米炭疽病病原菌的鉴定与有效药剂筛选

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:z306075045
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玉米是我国三大主要粮食作物之一。病害是影响玉米高产、稳产、优质的重要限制因素之一。本试验开展了玉米炭疽病病原菌的鉴定及生物学特性研究,在此基础上,探讨了 7种杀菌剂对玉米炭疽病菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制效果。试验主要研究内容如下:1.玉米炭疽病病原菌的鉴定采用组织分离法和单孢分离法从安徽省金寨县天堂寨镇采集的玉米炭疽病病叶上分离得到5株玉米炭疽病菌,菌株编号分别为TT23、TT37、TT48、TT47和TT40。通过柯赫氏法则,将分离纯化的炭疽病菌回接到健康的玉米叶片上,玉米叶片正常发病,并且发病症状与采集回来的病害样本症状相似。通过玉米炭疽病菌的菌落形态、产孢结构以及附着孢形态学特征,结合分子生物学方法深入分析了玉米炭疽病菌的分类地位。经PDA培养基纯培养观察,菌落灰白色,气生菌丝茂密,菌丝平均生长速率为7.75 mm/d。分生孢子单孢无色透明,长椭圆形,表面光滑,两端钝圆,无隔膜,长×宽=14.5~21μm×5.8~8.6μm。以病原菌的全基因组DNA为模版,通过ITS、ACT、CHS-1、β-Tub、GAPDH 5 个基因的对应引物扩增 ITS、ACT、CHS-1、β-Tub、GAPDH目的基因并测序,将5个测序基因序列在Genebank中进行比对,发现菌株TT23、TT37、TT48、TT47和TT40各基因位点绝大多数与果生炭疽菌相似,同时下载模式菌株或权威菌株各基因位点基因序列。5个基因位点基因序列分别与下载模式菌株基因序列进行分子系统学进化分析归类,结果显示均与果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)归为一类。根据形态学和分子系统学鉴定玉米炭疽病致病菌为果生炭疽菌。2.玉米炭疽病菌生物学特性研究本试验测定了温度、pH值、碳源、氮源、光照等外界因子对TT37菌株生长及产孢等生物学特性的影响。结果表明:TT37菌株在22~31℃范围内均能够较好的生长。在试验设定的温度范围内,供试菌株最适生长与产孢温度为28℃;53℃恒温水浴15 min菌丝不能生长,58℃恒温水浴15min分生孢子不能萌发。菌丝生长最适pH值为7,pH值为9时菌株产孢量最大,pH值大于9时孢子萌发受到明显抑制。碳、氮源试验结果显示,在供试的碳源中,葡萄糖为最佳碳源;在供试的氮源中,蛋白胨为最佳氮源。光照试验结果表明,TT37菌株对光照敏感,黑暗条件下菌株菌丝生长速率最快、产孢量最大。3.玉米炭疽病菌有效药剂的筛选采用室内毒力测定的方法,研究了多菌灵、吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑、丙硫菌唑菌唑、苯甲丙环唑和戊唑醇7种杀菌剂对TT37菌株菌丝生长及分生孢子萌发的抑制作用。结果表明:多菌灵、苯醚甲环唑和戊唑醇对TT37菌株菌丝生长的抑制效果相对较好,EC50值分别为0.157 μg/mL、0.244 μg/mL和0.247μg/mL。对分生孢子萌发抑制效果较好的杀菌剂是百菌清、苯醚甲环唑和戊唑醇,EC50值分别为0.100 μg/mL、1.001 μg/mL 和 1.118 μg/mL。
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