【摘 要】
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‘棉梨’是新疆本地梨品种,属于新疆梨(Pyrus sinkiangensis Yü.)系统。1987年引入新疆轮台国家果树资源圃,现主要分布于南疆梨产区。‘棉梨’花期早于新疆最具代表性的地方品种‘库尔勒香梨’,我们在前期对该品种开展授粉生物学特性调查时发现‘棉梨’存在无融合生殖的迹象,为了对其生殖特性有进一步的认识,我们结合授粉生物学研究,对‘棉梨’的雄蕊和雌蕊发育进行了解剖学研究,以期从微观角度
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2018YFD0201400); 新疆农业大学研究生科研创新项目“新疆‘棉梨’无融合生殖特性的研究”(XJAUGRI2017005)
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‘棉梨’是新疆本地梨品种,属于新疆梨(Pyrus sinkiangensis Yü.)系统。1987年引入新疆轮台国家果树资源圃,现主要分布于南疆梨产区。‘棉梨’花期早于新疆最具代表性的地方品种‘库尔勒香梨’,我们在前期对该品种开展授粉生物学特性调查时发现‘棉梨’存在无融合生殖的迹象,为了对其生殖特性有进一步的认识,我们结合授粉生物学研究,对‘棉梨’的雄蕊和雌蕊发育进行了解剖学研究,以期从微观角度揭示其无融合生殖的胚囊种类和无性胚形成方式,利用ISSR分子标记技术,检测无融合生殖子代的遗传纯合性以及鉴定其杂交后代是否为真杂种,为梨种质资源研究提供参考。本文以‘棉梨’为研究对象,基于授粉生物学、细胞学、胚胎学以及分子生物学的方法,主要的研究结果如下:(1)2018年至2020年连续三年进行田间授粉观察,发现去雄套袋与不去雄套袋座果率和单果结籽数相似,座果率在14%~25%之间,单果结籽数极低,平均每果种子数小于1粒。且明显低于人工授粉和自然授粉的座果率和结籽数。去雄套袋与不去雄套袋处理中雌蕊无法取得花粉,但有一定的种子形成,且这批种子的萌芽率为100%,说明‘棉梨’具有无融合生殖的能力且其无融合生殖形成可以不经过受精作用,但其发生率较低。人工授粉和自然授粉的座果率与单果结籽数相似,两者每果种子数在3~6粒之间,座果率在51%~72%之间,明显高于去雄套袋与不去雄套袋。授粉明显提高了‘棉梨’的座果率和单果结籽数,说明花粉对其结实率有显著影响,由此可以推测出人工授粉和自然授粉所形成的种子,可能有三种现象发生:假受精类型的无融合生殖、有性生殖或者两种生殖都存在。(2)通过细胞学研究,发现:(1)造成‘棉梨’花粉败育的原因是绒毡层提前解体,花粉母细胞减数分裂异常,致使花粉败育。属于花粉败育型雄性不育。(2)利用流式细胞术评估了‘棉梨’的基因组大小,并获得了染色体倍性。采用染色体压片法对流式细胞仪测得的结果进行验证,与流式细胞仪鉴定结果一致:‘棉梨’染色体数目为2n=2X=34,不存在混倍现象,为二倍体,且基因组大小为489.47±25.92 Mb。(3)通过胚胎学研究,观察自然授粉处理下胚囊发育过程,发现大部分大孢子母细胞通过减数分裂发育成成熟的有性胚囊,极少的大孢子母细胞会退化。大部分有性胚囊在受精后继续发育成胚,少部分有性胚囊会败育。另外,发现从大孢子母细胞出现到有性生殖的结束或败育的各个阶段都有新的无性胚囊原始细胞不规则发生,多数起源于珠心细胞,但也可发源于周缘组织细胞,具有空间多位性;在观察去雄套袋处理下胚囊发育的过程中,发现在阻碍了授粉的途径之后成熟的有性胚囊退化,在退化的有性胚囊旁边或者周缘组织出现无孢子生殖单核胚囊。在有些胚珠中甚至观察到两个原胚共同发育的现象,继而观察到原胚团发育成球形胚的过程。(4)用ISSR标记技术对田间试验进行验证,得出去雄套袋后代群体在分子水平具有较高的一致性,出现了与母本带型完全一致的植株,与母本遗传特性一致。人工授粉和自然授粉后代扩增出来的条带有父母共有条带,也有父母本特异性条带,也产生了父本或母本没有的特异性条带,但是没有一株后代从始至终都与母本条带一致。因此,人工授粉和自然授粉后代不存在假受精现象,均为真杂种。综合得出,‘棉梨’在有花粉的情形下只进行有性生殖,只有切断授粉途径才会刺激少量胚珠进行自主无融合生殖。
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