精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是哺乳动物体内唯一可以将遗传信息传递给下一代、功能单一的干细胞,体外分离培养SSCs为探索其生物学特性及其增殖、分化与去分化机制奠定了基础。SSCs在特定的体外培养条件下,即使无外源基因操作也可以重编程形成多能干细胞。多能干细胞不仅具有自我复制的能力,而且具有形成多种组织和细胞的能力,具有很大的潜在应用前景。诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)虽然在体内外可分化形成三胚层,但由于外源基因的插入使其应用受到制约。因此,SSCs更适用于人类临床及动物分子育种应用。本研究分为两部分,第一部分实验以小鼠作为动物模型,分离、纯化并体外培养小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,m SSCs)。采用机械分离法、两步酶消化法结合连续差速贴壁法成功分离、纯化得到来源于Oct4/GFP×CD1杂交品系F1代小鼠睾丸的mSSCs,并对体外培养的mSSCs进行鉴定分析。当细胞稳定生长时,通过观察细胞形态、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定体外分离和培养的细胞满足mSSCs的标准,为第二部分实验提供实验材料。第二部分实验主要集中于用小分子化合物诱导mSSCs去分化形成多能干细胞。获得的细胞克隆能稳定生长时,在基因表达水平进行鉴定分析,比如Oct4、Sox2、Nanog和Rex1。细胞形态、GFP表达、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色、RT-PCR和RT-qPCR检测结果初步鉴定,mSSCs可以通过小分子化合物诱导液向多能性方向转化,并形成具有多能干细胞特性的细胞。本研究既丰富了制备多能干细胞的方法,也为今后深入研究mSSCs重编程为多能干细胞的机制提供了基础实验材料,同时也为研究男性不育症提供了新的途径。