布鲁氏菌病（Brucellosis）是一种慢性、传染性的人畜共患病,由胞内寄生菌布鲁氏菌属（Brucella spp.）引起。布鲁氏菌病在我国被归为二类动物疫病,动物一旦感染布鲁氏菌病,均要销毁处理,目前主要通过对动物免疫接种进行预防。布鲁氏菌感染人群主要是人通过直接接触患病动物及其产品等途径,人被感染后通常采用对症治疗合并抗生素疗法,但是治疗周期长并且预后效果差,因此,急需研发出能有效清除细胞内布鲁氏菌的新型药物。Magainins是一类来自非洲雨蛙的抗菌肽,对多种微生物均有显著的抑制作用,包括细菌、真菌、病毒和原生动物,另外还有一定的抗肿瘤活性。TAT是目前广泛研究和使用的穿膜肽,不仅自身有一定的抗菌和抗肿瘤活性,还能与相应的治疗药物结合,将药物从胞外运输到胞内,同时不影响药物自身的功能。本研究将穿膜肽TAT与抗菌肽MagaininⅡ（MAG2）杂合成新的肽段（TAT-MAG2）,评估该融合肽对布鲁氏菌S2的体外抑菌效果,初步探索治疗布鲁氏菌病的新型有效药物。为了让肽段纯度更高,我们选择化学合成多肽TAT、MAG2和融合肽TAT-MAG2,纯度均大于95%,其中TAT-MAG2的TAT序列加在MAG2序列的N端。最小抑菌浓度检测结果表明,3条合成肽对于革兰氏阳性代表菌金黄色葡萄球菌均没有抑制作用。对于革兰氏阴性菌,TAT对大肠杆菌和布鲁氏菌S2没有抑制作用;MAG2对大肠杆菌和布鲁氏菌S2有相似的抑制作用,最小抑菌浓度均为50μM;TAT-MAG2对大肠杆菌的最小抑菌浓度为12.5μM,对布鲁氏菌S2的最小抑菌浓度为6.25μM。TAT-MAG2对大肠杆菌和布鲁氏菌S2的MIC值分别是MAG2的1/4倍和1/8倍。用4×MIC浓度的多肽分别作用于S2,检验多肽对S2的杀伤作用。杀伤动力学曲线图表明,与对照组相比,TAT全过程对S2无显著的抑制作用;MAG2在1、6和9小时对S2的生长有抑制作用;TAT-MAG2与S2共培养15小时以内,对S2的生长有显著的抑制作用。荧光显微镜观察结果表明,3条合成肽与S2菌体均能相互作用。为了进一步确定TAT-MAG2对S2的损伤作用,我们进行了扫描电镜分析,结果发现TAT-MAG2能使S2细胞膜结构发生改变甚至破裂。以上结果说明,与单独肽作用相比,融合肽TAT-MAG2对胞内菌S2的抑菌能力得到增强。对3条多肽的溶血活性和细胞毒性进行分析,在100μM浓度内,3条多肽对哺乳动物红细胞的溶血活性均低于5%,并且在相应的MIC值浓度下,对RAW264.7细胞无细胞毒性。布鲁氏菌属于胞内寄生菌,感染后主要进入巨噬细胞中复制与增殖。因此,有效的杀菌药物必须能同时进入细胞内杀灭胞内的布鲁氏菌。以RAW264.7巨噬细胞作为布鲁氏菌S2的感染对象,再用3条多肽分别作用于感染的巨噬细胞,检测TAT-MAG2对胞内的布鲁氏菌S2的增殖的抑制效果。分菌结果发现TAT-MAG2作用于感染的巨噬细胞2、4和8小时时间点,布鲁氏菌S2活菌数显著低于对照组;q PCR结果亦验证了分菌结果,说明TAT-MAG2对S2细胞内感染产生抑制作用。综合上述的实验结果,与TAT和MAG2相比,融合肽TAT-MAG2对胞内菌布鲁氏菌S2具有良好的体外抑菌效果,并且在工作浓度内表现低溶血活性和低细胞毒性,有望成为临床上治疗布鲁氏菌感染的潜在药物替代。