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目的:观察化疗药(顺铂)影响体外培养的人卵巢颗粒细胞的细胞凋亡情况及其分泌功能,来探讨左归丸含药血清是否通过调节PI3K/AKT信号通路来保护卵巢颗粒细胞,以及减缓卵巢功能损害的微观机制,为补肾养阴方药防治化疗后卵巢早衰的研究提供实验佐证。方法:将人卵巢颗粒细胞,经预培养后,用MTT法筛选出各组药物最佳浓度,其中以A组为空白对照组,单纯培养基培养。B组为模型组:选顺铂10mg/L,作用24h。C组为抑制剂组:在模型组基础上,用PI3K通路抑制剂LY294002,提前干预30min。D组作为补肾养阴方含药血清低剂量组:在模型组基础上,用5%浓度含药血清,作用48h。E组作为补肾养阴方含药血清高剂量组:在模型组基础上,用10%浓度含药血清,作用48h。共同培养后收集细胞液,用酶联免疫吸附法测定其FSH、LH、E2的表达含量。收集颗粒细胞,用流式细胞术分析颗粒细胞凋亡率,再用Real-time Q-PCR和Western Blot方法分别检测各组卵巢颗粒细胞对PI3K通路上相关基因和蛋白表达情况。结果:1.细胞凋亡顺铂作用后各组细胞均有不同程度凋亡。与A组相比,B组细胞凋亡率较高(p<0.01),说明顺铂对卵巢颗粒细胞有促凋亡作用。与B组相比,D、E组凋亡率均有下降(p<0.05),结果显示,各剂量补肾养阴含药血清组均能降低离体卵巢颗粒细胞凋亡率。2.ELISA检测结果与A组比较,各组FSH、LH、E2水平均显著下降(P<0.01);经治疗后,与B组相比,各组E2水平显著升高(P<0.01),LH水平持续下降(P<0.01),C组的FSH水平有所下降(P<0.05),D组和E组的FSH水平下降明显(P<0.01)。3.Real-time Q-PCR检测结果FOXO3a:与A组比较,B组FOXO3a表达量有所增高(P<0.05);与B组比较,D组中FOXO3a表达量降低(P<0.05),C、E组中FOXO3a表达量显著降低(P<0.01)。Bax:与A组比较,B组Bax表达量显著增高(P<0.01),E组Bax表达量有所下降(P<0.05);与B组比较,各组的Bax表达量显著降低,其中C、E组下降明显(P<0.01)。Bcl-2:与A组比较,B组Bcl-2含量有所下降(P<0.05),C、D组Bcl-2含量上升(P<0.05),E组Bcl-2含量显著升高(P<0.01);与B组比较,C组Bcl-2表达量有所上升(P<0.05),D、E组Bcl-2含量显著升高(P<0.01)。4.Western Blot检测结果FOXO3a:与A组比较,B组FOXO3a蛋白表达量明显上升(P<0.05),C、D、E组FOXO3a蛋白表达量稍有上升,但差异均无统计学意义(P>0.05);与B组比较,C、D、E组GC的FOXO3a蛋白表达量均有下降,但仅E组下降有统计学意义(P<0.05)。AKT:与A组比较,B组AKT蛋白表达量显著升高(P<0.01);与B组比较,D组有所下降(P<0.05),E组明显下降(P<0.01),C组也有下降但差异无统计学意义(P>0.05)。p-AKT:与A组比较,顺铂干预后,B组和C组的p-AKT蛋白表达量明显降低(P<0.01),以C组下降最明显(P<0.01);与B组比较,D组、E组均可见p-AKT蛋白表达量有所增加,以E组增加明显(P<0.05)。结论:1.补肾养阴方可以促进卵巢颗粒细胞中E2的分泌,有望调整POF患者的低雌激素状态。2.补肾养阴方可能通过影响凋亡因子Bcl-2与Bax表达水平,抑制化疗导致颗粒细胞凋亡,进而起到保护卵巢功能的作用;且高剂量组优于低剂量组。3.补肾养阴方可能通过上调PI3K/AKT通路上p-AKT水平,影响p-AKT与AKT比率,以及降低FOXO3a蛋白表达,进而有效抑制颗粒细胞受损,预防卵泡过早衰竭和闭锁,以起到保护卵巢功能的作用。