【摘 要】
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糖尿病是威胁人类健康的重大代谢性疾病之一,具有高致死率、高致残率和高医疗花费等特征。目前大多数降血糖药物都是化学合成的,药效显著的同时也会产生许多毒副作用,近年来可食植物成分作为预防和治疗疾病的手段逐渐成为国内外学者研究的热点。天山茶藨(Ribes meyeri Maxim.)是新疆特有的可食茶藨属植物,具有抗氧化、降血糖等生物活性,然而,关于天山茶藨化学成分及生物活性的报道很少。本研究采用高效液
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糖尿病是威胁人类健康的重大代谢性疾病之一,具有高致死率、高致残率和高医疗花费等特征。目前大多数降血糖药物都是化学合成的,药效显著的同时也会产生许多毒副作用,近年来可食植物成分作为预防和治疗疾病的手段逐渐成为国内外学者研究的热点。天山茶藨(Ribes meyeri Maxim.)是新疆特有的可食茶藨属植物,具有抗氧化、降血糖等生物活性,然而,关于天山茶藨化学成分及生物活性的报道很少。本研究采用高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(High performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-QTOF-MS/MS)联用方法对天山茶藨叶、果实的化学成分分别进行了定性分析;采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(Ultra performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry,UPLC-MS/MS)联用方法对天山茶藨叶、果实的化学成分进行了定量分析;在此基础上,通过DPPH和ABTS自由基清除实验对天山茶藨叶、果实甲醇提取物及不同萃取部位的抗氧化活性进行研究;通过α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、PTP1B抑制活性实验及对3T3-L1前脂肪细胞的葡萄糖消耗对它们的体外降血糖活性进行了研究,旨在发现天山茶藨叶和果实中的活性部位和活性成分。主要研究结果如下:在天山茶藨叶酚类化合物定性分析中,采用负离子模式,尝试鉴定了天山茶藨叶甲醇提取物中77种酚类化合物,包括44种酚酸类和33种黄酮类化合物,其中发现一个潜在的新化合物—具有四糖基团的槲皮素葡萄糖苷。并建立了UPLC-MS/MS方法,对天山茶藨叶中19种多酚类成分(没食子酸、表没食子儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯甲酸、表儿茶素、咖啡酸、对香豆酸、芦丁、阿魏酸、异槲皮苷、水杨酸、肉桂酸、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、木犀草素、槲皮素、芹菜素、羟基芫花素)进行定量分析,结果表明天山茶藨叶甲醇提取物及4个不同萃取部位中19种多酚类成分的含量差异显著。其中含量较高的成分为芦丁、表没食子儿茶素、山奈酚-3-O-芸香糖苷、异槲皮苷、原儿茶素、表儿茶素和绿原酸,并且在乙酸乙酯部位中含量最高,芦丁含量达到86.07±4.06 mg/g。在以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,在8min内19种多酚类化合物实现较好的分离。19种多酚类化合物在测定的质量范围内具有良好的线性关系(R~2≥0.9967),稳定性、重复性、精密度RSD≤6.98%,加样回收率范围在82%~105%,说明该方法准确度良好。在天山茶藨果实的定性分析中,采用正离子模式,尝试鉴定了天山茶藨果实中26种花青素类成分,主要是矢车菊素衍生物、飞燕草素和天竺葵素的衍生物;在负离子模式下,尝试鉴定了17种成分,包括酚酸类和黄酮类成分。并在正离子模式下,采用多反应监测(Multiple response monitoring,MRM),建立了一种UPLC-MS/MS方法同时测定天山茶藨果实中矢车菊素-3-O-芸香糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、飞燕草素-3-O-芸香糖苷和飞燕草素-3-O-葡萄糖苷4种花青素的含量。测定表明在天山茶藨果实甲醇提取物及花青素部位中矢车菊素-3-O-芸香糖苷的含量最高,分别达到22.01±0.37 mg/g,79.36±1.01 mg/g。同时为了优化四种花青素的分离效果,考察了3种不同的流动相体系,在以乙腈-5%甲酸水作为流动相梯度洗脱时,4种花青素的分离效果最佳,峰形良好,各成分在8 min内达到基线分离。方法学研究表明:在考察的浓度范围内,四种花青素的线性关系良好(R~2≥0.9941),平均加样回收率为83%~94%,RSD≤5.77%。表明该方法结果准确,简便快速,重现性良好。抗氧化活性研究表明:天山茶藨叶、果实各萃取部位的抗氧化能力均有差异,对于DPPH自由基,各萃取部位的抗氧化活性要低于抗坏血酸(Vc),但与其他萃取部位相比,天山茶藨叶乙酸乙酯部位的DPPH清除率最高;对于ABTS自由基,除了天山茶藨叶乙酸乙酯部位的抗氧化活性高于Vc,其他萃取部位的抗氧化活性均低于阳性对照Vc。降血糖活性研究表明:天山茶藨叶乙酸乙酯部位和果实花青素部位对于α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶具有更好的抑制活性,它们的IC50均高于阳性对照阿卡波糖;对于PTP1B各个萃取部位均没有显著的抑制作用。天山茶藨叶、果实各萃取部位均促进3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖摄取,说明天山茶藨叶和果实中具有潜在的降血糖活性成分,对其中的活性成分和作用机理值得进行更深入的研究。
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