CpG DNA对异育银鲫免疫细胞活性诱导作用的研究

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近年来的研究发现,细菌基因组DNA利人工合成的含有未甲基化CpG基序的特定寡核苷酸序列(统称为CpG DNA)能够直接或间接刺激人和小鼠等多种高等动物的B淋巴细胞和单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等抗原递呈细胞以及天然杀伤细胞的活化或增殖,是一种具有广泛作用的免疫激活剂。但是关于CpG DNA对鱼类免疫功能调节作用的研究才刚刚起步。本实验首次探讨了6种人工合成的CpG DNA对异育银鲫体外培养的头肾巨噬细胞、外周血白细胞的活化作用。6种序列分别为:①1826(GACGTT);②2006(GTCGTT);③1670(AACGTT);④1670-N(AACGTT,更靠近5’端);⑤1670-D(含2个AACGTT);⑥1670-R(含有反向“CG”序列,即AAGCTT)。在细胞水平上,分别用NBT法检测氧呼吸爆发活性;通过测定NO的含量检测氮呼吸爆发活性;采用MTT法测定外周血白细胞的增殖。在分子水平上,以异育银鲫体外培养的巨噬细胞为研究对象,探讨了人工合成的6种CpG DNA对2种重要的细胞因子IL-1β、IL-12基因表达水平的影响。体外作用24h后分离总RNA,经过RT-PCR扩增获得IL-1β和IL-12 cDNA。采用普通RT-PCR对这2种细胞因子的表达进行定性分析;进而采用荧光定量RT-PCR对这2种细胞因子的表达进行定量分析。结果如下:1.除1670-R外,其余5种CpG DNA都能引起巨噬细胞和外周血白细胞的活化,主要表现为细胞内的氮氧呼吸爆发活性的增加和细胞增殖活性的提高;通过定性分析,IL-1β、IL-12扩增片段明亮清晰,而对照组细胞中几乎扩增不出相应的cDNA;通过定量分析,IL-1β、IL-12的表达量与对照组的相比具有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异。反向序列1670-R与对照组相比,没有明显的增强效果。2.1670-D的免疫增强效果最为显著(P<0.01)。3.CpG DNA的免疫增强效果还体现出一定的效应,当浓度为10μg·mL-1时,效果最为显著(P<0.01)。研究结果表明,与在哺乳动物中的作用一样,CpG DNA也是鱼类免疫系统的一种新型有效的免疫调节剂,它能增强鱼体内细胞和体液介导的免疫应答,从而增强机体的抗病能力。同时它也将在减少鱼类病害和增强鱼用疫苗的免疫效力方面有着广泛的应用前景。
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