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前言:喉癌(laryngeal carcinoma)是发生在喉部的恶性肿瘤,以鳞状细胞癌多见,是耳鼻喉科最常见的恶性肿瘤之一。在我国占头颈部肿瘤的13.9%,近年来发病率仍在上升。喉癌患者以40～60岁为主,在我国东北和华北地区发病率高,且男性发病率高于女性。喉癌的发病与吸烟、饮酒、性激素水平、人乳头状瘤病毒感染、空气污染、职业因素等因素有关,其中吸烟和饮酒是主要危险因素。目前,喉癌相关研究虽有很大进展,但喉癌发生发展的分子机制仍不清楚。因此,从分子水平研究喉癌发生发展机制显得尤为重要,并可为喉癌分子诊治的深入研究提供线索。MYCT1(myc target 1)在不同肿瘤中发挥癌基因或抑癌基因作用,提示其具有组织特异性并可能通过不同的信号转导途径参与肿瘤的发生和发展。研究表明,MYCT1基因在喉癌中是潜在的抑癌基因,能够抑制喉癌细胞的增殖和迁移,促进细胞的凋亡,然而其具体机制仍不清楚。PRSS21(serine protease 21)基因编码睾丸素,睾丸素正常在睾丸生殖细胞中表达,而在其它正常组织中表达很低或不表达。然而,PRSS21在干细胞起源的睾丸肿瘤中不表达,但在卵巢癌、宫颈癌、胃癌、黑色素瘤和淋巴瘤等其它肿瘤中高表达。PRSS21可以促进卵巢癌、宫颈癌、胃癌等肿瘤的发生、侵袭和转移,与肿瘤的进展密切相关。虽然PRSS21在一些肿瘤中表达异常并发挥作用,但PRSS21在喉癌中的表达情况和作用机制尚不明确,有待进一步研究。本课题组通过iTRAQ技术在稳定转染MYCT1的喉癌细胞中检测出一系列差异表达的蛋白质,发现PRSS21蛋白表达降低,提示PRSS21可能与MYCT1和喉癌有关。由此我们推测PRSS21在喉癌中发挥某种作用,且MYCT1可通过调控PRSS21影响喉癌细胞的生物功能。因此,本研究拟采用分子生物学相关技术探究PRSS21在喉癌中的表达和功能以及MYCT1对PRSS21的影响,为喉癌分子机制的研究提供新的方向。材料和方法:1、材料和试剂:人喉癌细胞系(Hep-2细胞)、人口腔角质细胞系(HOK细胞)、44对喉癌组织和癌旁组织样本。2、方法:细胞培养、组织处理、质粒提取、细胞转染、总RNA提取、RT-PCR和Real-time PCR、膜蛋白和细胞浆蛋白提取、Western Blot、CCK-8实验、克隆形成实验、划痕实验。结果:1、Real-time PCR和Western Blot结果显示PRSS21在喉癌组织和细胞中表达水平显著高于对照组(P<0.05)。2、临床特征分析结果显示PRSS21的表达与喉癌的T分期、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。3、CCK-8、克隆形成和细胞划痕实验结果显示敲减PRSS21可显著抑制喉癌细胞的增殖和迁移(P<0.05)。4、Real-time PCR和Western Blot结果显示在喉癌细胞中MYCT1显著抑制PRSS21 mRNA和蛋白水平的表达(P<0.05)。5、CCK-8、克隆形成和细胞划痕实验结果显示敲减MYCT1可显著促进喉癌细胞的增殖和迁移(P<0.05);敲减PRSS21可显著回复敲减MYCT1对喉癌细胞增殖和迁移的影响(P<0.05)。结论:1、PRSS21在喉癌中高表达,提示其在喉癌中发挥癌基因作用。2、PRSS21的表达与喉癌T分期、淋巴结转移和TNM分期相关。3、PRSS21具有促进喉癌细胞增殖和迁移的能力。4、MYCT1抑制PRSS21在喉癌中的表达水平。5、PRSS21介导MYCT1抑制喉癌细胞的增殖和迁移。